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♦蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶
♦鼠源，重组蛋白(草地夜蛾，又称秋粘虫Spodoptera frugiperda Sf9细胞)

分子量 36 kDa，但SDS-PAGE表观分子量是33 kDa。

质保声明 无蛋白酶和磷酸酶活性。 热失活 65°C，20分钟。

概述

Ca²⁺/钙调素依赖型蛋白激酶II (CaMKII)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。它依赖于Ca²⁺/钙调素，是α亚基单体的截短型(包括1-325氨基酸残基)。在有Ca²⁺和钙调素存在时，位于286位的苏氨酸发生自身磷酸化，活化CaMKII，并产生不依赖Ca²⁺/钙调素的生物活性(1,2)。

影响识别因素

CaMKII磷酸化反应的最小识别功能域为RXXS/T。最近的报道显示，促使磷酸化反应的位点除了-3R外还有-5、-2和+1位。因此，CaMKII优先磷酸化的位点依次为含HydXRXXS/T和HydXRNBXS/T功能域的底物，其中Hyd代表疏水，X代表任一氨基酸，NB代表非碱性氨基酸残基(3)。

反应条件 磷酸化底物之前，需要先活化CaMKII，即在有CaCl2和钙调素存在的条件下，用ATP/Mg2+使CaMKII自身磷酸化。之后，外源底物的磷酸化便不再需要CaCl2和钙调素。

用CaMKII磷酸化 1. 活化CaMKII： 在添加有100 μM ATP，1.2 μM 钙调素和2 mM CaCl2的1X CaMKII反应缓冲液中稀释所需CaMKII。30°C条件下温育10分钟。随后的外源底物磷酸化都不需要CaCl2和钙调素的参与。 2. 底物磷酸化： 混和底物和1X CaMKII反应缓冲液，加入100 μMATP和终比活性为100-500 μCi/μmol的γ-放射性标记的ATP，再加入活化了的CaMKII，30°C温育。

反应缓冲液(随酶提供) 10X CaMKII反应缓冲液 10X CaCl2 (20 mM) 10X 钙调素 (12 μM) 50X ATP (10 mM)

比活性 ~5,000,000 units/mg。

来源 来自感染有重组杆状病毒(baculovirus)的草地夜蛾(又称秋粘虫Spodoptera frugiperda)Sf9细胞，携带有大鼠CaMKII截短型基因(Dr. H. Shulman惠赠)。