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♦ 双特异性：蛋白丝氨酸／苏氨酸／酪氨酸磷酸酶
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概述 Lambda 蛋白磷酸酶（Lambda PP）是一种 Mn2+ 依赖型蛋白磷酸酶，对磷酸化的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基有活性。其由 221 个氨基酸组成，由Lambda 噬菌体上开放阅读框 ORF221 编码（1，2）。 Lambda PP 也可作用于磷酸化的组氨酸残基（2）。
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来源 重组 E. coli 菌株，携带有 λ 噬菌体的 ORF221 开放阅读框，受 T7 表达系统调控。(由Dr.D.Barford惠赠) (2)。
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反应条件 1X 蛋白金属磷酸酶（PMP）反应缓冲液 [50 mMHEPES（pH 7.5 @ 25 ℃），100 mM NaCl，2 mM DTT和 0.01% Brij 35]。加入 1 mM MnCl2 ，30 ℃ 温育。
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随酶提供的试剂 10X 蛋白金属磷酸酶（PMP）反应缓冲液
10X MnCl2 （10 mM）
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比活性 ~592,600 units/mg。
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分子量 25 kDa。
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品质保证 Lambda PP 无蛋白酶污染。
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单位定义 1 单位指在 50 μl 的反应体系中，30 ℃条件下 1 分钟内水解 1 nmol 的对硝基苯酚磷酸盐（50 mM，NEB #P0757）所需的酶量。
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浓度 400,000 units/ml。
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贮存条件 100 mM NaCl，50 mM HEPES（pH 7.5 @25 ℃），0.1 mM MnCl2 ，0.1 mM EGTA，2 mM DTT，0.01% Brij 35 和 50% 甘油。保存于 -70 ℃。
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热失活 在有 50 mM Na2 EDTA 存在的条件下，65 ℃，1 小时。
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使用注意 建议用 Lambda PP 对蛋白进行去磷酸化的初始反应条件为： 在 50 μl 反应体系中，100 units 的 Lambda PP 在 30 分钟内可以除去 10 μM（就磷酸浓度而言）的髓磷脂碱蛋白（phospho-MyBP，18.5 KDa）中约 100％ 的磷酸基团（0.5 nmol）。 用 cAMP 依赖型蛋白激酶专一性地磷酸化 MyBP的丝氨酸/苏氨酸残基，磷酸化的 MyBP 作为底物，来估算 Lambda PP 的蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶（PSP）活性。对于蛋白酪氨酸激酶（PTP）活性的测定，所用底物为经 Abl 酪氨酸蛋白激酶专一性地对酪氨酸残基进行磷酸化的 MyBP。
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参考文献 (1) Cohen, P.T.W.and Cohen, P.(1989) Biochem.J .,260, 931–934.
(2) Zhuo, S.et al.(1993) J.Biol.Chem. , 268,17754–17761.
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Language
Lambda蛋白磷酸酶 (Lambda-PP)