相关产品 PNGase F (无甘油)
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#P7817S 250 µg ¥669 糖苷内切酶反应缓冲液套装
10X G5 和 G7 反应缓冲液，
10X 糖蛋白变性缓冲液，
10% NP-40
#B0701S ¥129
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♦ 去除糖蛋白的 N-连聚糖 ♦ 无甘油糖苷酶产品适用于 HPLC
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概述 肽 N- 糖苷酶 F，即 PNGase F，是一种酰氨酶，可以在 N- 连糖蛋白的高甘露糖、杂合和复合寡糖部分最内侧的 N- 乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间进行切割（1）。PNGase F 还以不含甘油的形式提供，便于在 HPLC 方法中取得最佳效果。
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来源 从脑膜败血性黄杆菌（Flavobacterium meningosepticum ）中提取纯化（2）。
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反应条件 于糖蛋白变性缓冲液（含 5% SDS，400mM DTT）中100 ℃ 煮沸 10 分钟使糖蛋白变性。再在加入 1%NP-40 的 1X G7 反应缓冲液 [50 mM磷酸钠（pH 7.5@ 25 ℃）] 中于 37 ℃ 温育，以进行酶切反应。
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随酶提供的试剂 10X 糖蛋白变性缓冲液
10X G7 缓冲液
10% NP-40
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比活性 ~1,800,000 units/mg。
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分子量 36 kDa。
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品质保证 无外切糖苷酶污染，无内切糖苷酶 F1 、F2 和 F3 活性。无污染的蛋白水解活性。
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单位定义 1 单位指在 10 μl 的反应体系中，37 ℃ 条件下1 小时 从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95% 的碳水化合物所需要的酶量（65 NEB units = 1 IUB milliunit）。
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浓度 500,000 units/ml。
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贮存条件 PNGase F：50 mM NaCl，20 mM Tris-HCl（pH 7.5@ 25 ℃），5 mM Na2 EDTA 和 50% 甘油。保存于-20 ℃。 PNGase F（无甘油型）：50 mM Nacl，20 mM Tris-HCl（pH7.5 @ 25 ℃），5 mM Na2 EDTA，4 ℃ 保存，请勿冻存。
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热失活 70 ℃ 10 分钟。
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使用事项 已知 PNGase F 的活性受 SDS 的抑制，所以在反应混合物中必须加入 NP-40。 要使天然糖蛋白去糖基化，或许需要增加酶量和延长温育时间。
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参考文献 (1) Maley, F.et.al.(1989) Anal.Biochem .,180, 195-204
(2) Plummer, T.H., Jr and Tarentino, A.L.(1991)Glycobiology , 1, 257-263
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Language
肽 N-糖苷酶 F (PNGase F)