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绿豆核酸酶
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更新 2025-08-12 18:04
 
详细信息
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♦  除去 DNA 或 RNA 分子的 3' 或 5' 突出末端,形成可以用连接酶连接的平齐末端 ♦  构建转录图谱 ♦  切割发夹结构中的 loop 环 ♦  从基因组 DNA 中切除基因编码序列 ♦  产生新的限制性酶切位点(如图)

               A) 分子量标准(λDNA/HindIII消化)
 B) M13mp8(超螺旋形式)
 C) M13mp8/NcoI消化
 D) M13mp8/HindIII消化
 E) 绿豆核酸酶处理D泳道产物
 F) E泳道产物加入T4 DNA连接酶
 G) NcoI消化F泳道产物
 H) HindIII消化F泳道产物


概述 本品是一种单链DNA或RNA特异性的内切酶,可以从DNA或RNA分子的末端降解单链突出粘端,产生可连接的平末端。

来源 绿豆芽。

反应条件 1X 绿豆核酸酶反应缓冲液 [50 mM NaAc(pH 5.0 @ 25 ℃),30 mM NaCl,1 mM ZnSO4],30 ℃ 温育。在NEBuffers 1、2、4 中也有活性。

质保声明 无双链外切酶污染。

单位定义 1 单位指 30 ℃ 条件下,1 分钟产生 1 μg 酸溶性总核苷酸所需要的酶量。

活性检测条件 1X 绿豆核酸酶反应缓冲液,以0.5 mg/ml 变性的小牛胸腺DNA作底物。



浓度 10,000 units/ml

贮存条件 10 mM NaAc (pH 5.0 @ 25°C), 0.1 mM ZnAc, 1 mM cysteine, 0.001% Triton-X 100 和 50% 甘油。-20°C 贮存。

使用注意 不要尝试热失活。在该酶热失活前,DNA 会发生“呼吸”作用,从而导致降解。

参考文献 (1) Kowalski, D. et al. (1976) Biochemistr y, 15, 4457–4463.
(2) McCutchan, T.F. et al. (1984) Science , 225, 626–628.

产生新的限制性酶切位点(见图) M13mp8 polylinker克隆区所含序列: 5´...CCAAGCTTGG...3´
3´...GGTTCGAACC...5´ 用HindIII进行消化 5´...CCA AGCTTGG...3´
3´...GGTTCGA ACC...5´ 加入绿豆核酸酶(除去5´突出端) 5´...CCA TGG...3´
3´...GGT ACC...5´ 加T4 DNA连接酶 5´...CCATGG...3´
3´...GGTACC...5´ 产生新的NcoI(NEB #R0193)酶切位点

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