Bst DNA 聚合酶, 大片段
.cpmsbt {border-bottom:1px solid #CC9966;color:#CC9933;font-family:Verdana;font-size:11pt;font-weight:bold;width:594px;} ♦ 富含 GC 区域的 DNA 测序（2，3） ♦ 纳克含量 DNA 模板的快速测序（4） ♦ 可用于要求嗜温链置换的实验 概述 Bst DNA聚合酶大片段是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，具有5´→3´DNA聚合酶活性，但不具有5´→3´外切核酸酶活性。 来源 来源于 E.coli 菌株，此菌株含有来自 Bacillusstearothermophilus DNA 聚合酶的基因，该基因缺失了5' →3' 外切核酸酶结构域。应用基因重组技术，将麦芽糖结合蛋白（MBP）基因与该基因融合表达，融合蛋白经纯化后再在体外切除掉 MBP，纯化后的聚合酶不含 MBP（1）。 反应缓冲液 1X ThermoPol Reaction Buffer 4 )2 SO4 , 2 mM MgSO4 , 0.1% Triton X-100]。 单位定义 1 单位指 65 ℃ 条件下，30 分钟内使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。 活性检测条件 50 mM KCl, 20 mM Tris-HCl (pH 8.8),10 mM MgCl2 , 30 nM M13mp18 ssDNA, 70 nM M13测序引物 (-47) 24 mer, 200 μM dATP, 200 μM dCTP,200 μM dGTP, 100 μM [3 H] dTTP, 100 μg/ml BSA 和酶。65°C温育。 浓度 8,000 units/ml 和 120,000 units/ml。 贮存条件 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.1% Triton X-100和50%甘油。贮存于-20°C。 热失活 80°C 10分钟。 注意事项 Bst DNA 聚合酶不具有 3' →5' 外切酶活性。 长期贮存需加入 100 μg/ml BSA 或 0.1% Triton X-100。 建议反应温度不要超过 70 ℃。 Bst DNA 聚合酶不能用于热循环测序或 PCR。 参考文献 (1) Aliotta, J.M. et al. (1996) Genet . Anal., 12, 185–195. (2) Griffin, H. and Griffin, A. (1994). PCR Technology (p.p.228–229). Florida: CRC Press. (3) McClary, J. et al. (1991) J. DNA Sequencing and Mapping ,1, 173–180. (4) Mead, D.A. et al. (1991) BioTechniques, 11, 76–87.
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Bst DNA 聚合酶, 大片段