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制品说明：
Bst DNA聚合酶（大片段）是嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）DNA聚合酶蛋白的一部分，该酶具有5’→3’聚合酶活性，无5’→3’核酸外切酶活性。

浓度（比活）：
浓度 120,000 U/mg

用途：
·重组酶
·比活力：120,000 U/mg
·复杂的二级 结构测序

来源：
来源于大肠杆菌，重组有B st DNA Polymerase（大片段）基因

酶贮存液：
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1.0 mM DTT
0.1 mM EDTA
0.1% Triton X-100
50% 甘油
pH 7.5，25°C保存

随酶提供：
10X PCR Buffer II

10X PCR Buffer II:
200 mM Tris-HCl
100 mM (NH4)2SO4
100 mM KCl
20 mM MgSO4
1.0% Triton X-100
pH 8.8，25°C保存

单位定义：
1单位指65℃条件下，30分钟内使10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

核酸污染检测
单链 核酸外切酶活性：
在50μL反应体系中，10μL酶溶液和11,000 cpm放射性标记的单链DNA底物作用，37℃孵育4小时，溶液中可溶性TCA的释放量 小于5.0%。

双链 核酸外切酶活性：
在50μL反应体系中，10μL酶溶液和5,000 cpm放射性标记的双链DNA底物作用，37℃孵育4小时，溶液中可溶性TCA的释放量 小于0.5%。

核酸 酶内切活性：
在50μL反应体系中，10μL酶溶液与0.5μg pBR322 DNA作用，37℃孵育4小时，经琼脂糖凝胶电泳，无肉眼可见的环状切口DNA出现。

质量控制分析
单位定义方法：
酶的单位活性是 通过2倍连续稀释法测得的。用1X reaction buffer稀释本酶，加入到含10μg 小牛胸腺DNA，1X PCR Buffer II，4m Ci/mL 3H-dTTP和100μM dNTPs的50μL反应体系中，酶的终浓度0.00075~0.1μg/μL。37℃条件下孵育10分钟，冰浴后进行1%的琼脂糖凝胶电泳，然后按照Sambrook and Russell的方法进行分析（Molecular Cloning, v3, 2001, pp. A8.25-A8.26）。

蛋白浓度测定（OD280）：
标准操作下，2.0μL蛋白样品，以2.0mg/ml BSA标准样（Pierce Cat#23209）为阳性对照，产品保存液为空白对照，经Nanodrop ND-1000 分光光度计测定OD280值。3次检测的平均值，根据吸光系数转换为52,770mg/mL，分子量为66,215Da。标准样品的允许误差为±5%。

SDS-PAGE（物理纯度检测）
4-20%的变性Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝胶，取2.0μL浓缩酶上样，两侧分别取分辨分子量范围较大的蛋白Marker和2.0μL 100倍稀释的待测酶上样。凝胶电泳后进行染色，并通过比较样品确定酶的纯度。本次实验的验收标准为，当浓缩样品中的污染物条带的总质量不超过稀释样品中的目的条带的蛋白质的质量时，可判定浓缩样品的浓度大于99%。

E.coli 16s rDNA污染检测：
将5μL酶溶液进行变性，用16s RNA基因位点的寡聚核苷酸引物 ， 进行 TaqMan qPCR 分析， 检测E.coli基因组DNA污染物的存在。根据无模板对照的Ct值和标准曲线 的 比对结果，本检测的下限可达到10个拷贝/样品。

注意事项：
活性检测过程中，按上述方法加入的小牛胸腺DNA底物的量大约是Beese等推荐的方法用量的3倍。

推荐贮存条件：
-20℃

参考文献：

1. Kiefer, et al. Structure 15 January 1997. 5, 95-108.