醋酸甲孕酮ELISA快速检测试剂盒
1. 简介
间接竞争性酶联免疫分析方法定量测定牛奶、肉样组织及水产品中醋酸甲羟孕酮的残留。试剂盒中包括了所有检测用的试剂。包括标准曲线实验在内共有96 个实验孔，建议采用两孔平行实验。

2. 用途
本试剂盒用于定量测定包括牛奶、肉样及水产品在内的各种动物源性食品中醋酸甲羟孕酮的残留。醋酸甲孕酮（简称MPA）、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸氯化孕酮是孕酮的衍生物，又称乙酰基促孕激素。可以促进动物的生长，常用于猪牛等。但在欧盟国家是禁止使用乙酰促孕激素的。

3. 测定原理
本试剂盒的测定是基于免疫学中抗原抗体特异性反应的原理而建立的。微孔板包被有醋酸甲羟孕酮抗原。加入醋酸甲羟孕酮抗体，醋酸甲羟孕酮标准品或样品提取液。标准品或样品中提取的甲孕酮能与酶标板上的甲孕酮包被原竞争性地结合定量的抗体，没有结合的抗体、标准品或样品中提取的甲孕酮在洗涤步骤中被除去。再加入酶标羊抗兔二抗与微孔中的兔抗醋酸甲羟孕酮抗体反应。洗涤除去没有反应的酶标羊抗兔二抗。加入显色液温育，酶标二抗将无色的显色剂转化为蓝色的产物，加入终止液后颜色由蓝色转变为黄色，在450nm 处测量每孔的O.D 值。O.D 值与样品中的醋酸甲羟孕酮浓度成反比。

4．试剂盒组成
1）包被有抗原的96 微孔板：1 块（96 孔，12 条×8 孔）
2）醋酸甲羟孕酮标准品7 瓶：0ng/ml ；0.4ng/ml；0.8ng/ml；2ng/ml；5 ng/ml；10 ng/ml；50 ng/ml
3）100× 醋酸甲羟孕酮抗体浓缩液：1 瓶 ×0.15ml
4）160×酶标二抗浓缩液：1 瓶 ×0.15ml
5）10× 浓缩洗涤液：1 瓶 ×50ml
6）样品稀释缓冲液：1 瓶 ×50ml
7）抗体、酶标稀释缓冲液 1 瓶 ×20ml
8）显色液：1 瓶 × 15ml
9）反应终止液：1 瓶 × 8ml
10）添加用的25ng/ml的标准品

5．工作液的准备
1）洗涤液：1 倍10×浓缩洗涤液加9 倍蒸馏水
2）抗体工作液：用抗体、酶标稀释缓冲液将100×抗体稀释100倍使用。
3）酶标工作液：用抗体、酶标稀释缓冲液将160×酶标二抗稀释160倍使用。

6. 储存条件
保存试剂盒于4℃条件下，不要冷冻。试剂盒应置于避光处保存，未用完的微孔板置于锡箔袋中密封保存。

7. 灵敏度和交叉反应
交叉反应性：
醋酸甲孕酮 100%
醋酸甲地孕酮 43%
甲孕酮 <0.5%
灵敏度：测试曲线线性范围0.4-50ng/ml

8. 样品预处理
8.1 牛奶

8.2 肉样组织及水产品

8.3 肠衣样品

9. 酶联免疫分析程序
1）取所需量的包被板孔条装在酶免板架上。
2）分别吸取100μl 标准品和样品加至相应的微孔（双孔）中，再各加入50μl 抗体混匀，加盖，在37℃温育32min。
3）倒出孔中的液体，每孔加入250μl 稀释好的洗涤液洗涤，重复操作四次。
4）每孔加入酶标二抗100μl， 37℃温育32min。
5）重复步骤3，反复洗涤四次。
6）每孔加入100μl底物溶液，37℃避光温育15 min
7）每孔加入50μl 反应终止液，混匀。测量O.D.450nm 值，测定2－3次，取平行较好数值用于计算。

10. 结果计算
1) 以标准浓度与所获得的各标准点和样品的平均光密度（OD）值做log-logit 回归，在标准曲线上求出相应的醋酸甲羟孕酮浓度值。
2) 或用仪器设定的程序直接求得样品的醋酸甲羟孕酮浓度值。
注意：为了获得样品中实际醋酸甲羟孕酮的浓度，计算曲线读取的醋酸甲羟孕酮的浓度必须乘以稀释系数。根据上述样品处理步骤，稀释系数如下：
牛奶…………………………………………5.5
肉样组织及水产品…………………………2.0
肠衣样品……………………………………1.0

11. 注意事项
1）室温低于20℃或试剂及标本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的值偏低。
2）在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。
3）标准物质和显色液对光敏感，最好避免直接暴露在光线下。
4）混合要均匀，洗板要彻底（包括加样品和标准液的时候都必需充分混合均匀）。
5）反应停止液为强酸性物质，避免接触皮肤。
6）不要使用过了有效期的试剂盒，也不要稀释或搀杂使用不同生产厂家的试剂盒这样会引起灵敏度降低。
7）试剂盒的储存条件是2-8℃，不要冷冻。