任意DNA片段都可作为点突变、缺失或插入的原料。

1、引物设计。一对引物在其5’末端与载体具有15bp的同源序列，另一对为了引入所需突变（点突变，缺失或插入）。
2、在PCR反应中，高保真DNA聚合酶延伸引物，放大DNA片段的基因突变。
3、随后，便可使用技术将突变的DNA片段插入到所需载体。