【产品名称】猴逆转D型病毒（SRV/D）核酸检测试剂盒（冻干型/RT-PCR-荧光探针法）
【包装规格】48测试/盒
【预期用途】
本试剂盒采用荧光探针RT-PCR方法实时检测，适用于实验动物猴逆转D型病毒（simian type-D retrovirus, SRV/D）核酸特异基因的快速定性检测。冻干检测试剂中包含热启动Taq DNA聚合酶、热敏UNG酶、RNase抑制剂、M-MuLV（H-）逆转录酶、SRV/D特异基因引物探针等成分。本产品供科研和品控。
【试剂盒组成】

试剂盒组成	规  格
冻干检测试剂-SRV/D	8测试*6条
复溶液-SRV/D	750μL ×2管
超纯水	300μL ×2管
冻干阳性对照-SRV/D	2管

【储存条件及有效期】阴凉处室温避光储存，有效期12个月。
【适用仪器】
适用于可对0.2mL PCR管进行扩增的任意荧光定量PCR仪，例如天隆Gentier48R/32R，ABI7500，博日FQD-16B(EA4)等。
【样本类型】
适用样本类型：实验动物猴血清、血浆或血液制品等。
【检测方法】

1. 核酸模板制备（样本制备区）

建议使用病毒DNA/RNA核酸提取试剂盒提取核酸模板，血清或血浆用量100-200μL。

1. 阳性对照复溶

首次使用时，在离心机中快速离心20-30s，使附着在管盖或管壁上的冻干阳性对照聚集于管底，向其中加入50μL超纯水，溶解后混匀，即为阳性对照。复溶后-20℃储存。
注1：-20℃取出后有沉淀析出属正常情况，回复至室温后稍吹打混匀溶解即可使用。
注2：阳性对照每次使用完毕，及时-20℃储存。

1. 核酸扩增
   1. 启动反应仪器，提前预热，设置反应程序为：

	温度(℃)/时间	循环数
逆转录	50℃/5min	1
预变性	94℃/5min	1
扩增	94℃/10s	45
	60℃/25s(荧光基团选择FAM；淬灭基团选择None)

1. 1. 撕开铝箔袋，取出冻干检测试剂，设置n个反应管(n=1管阴性对照+样本数+1管阳性对照)，打开管盖，加入22.5μL/管复溶液，盖上管盖；

注3：如果冻干颗粒粘在管盖或管壁，先将冻干颗粒甩至管底，再打开管盖。

1. 1. 按顺序分别加入阴性对照（注：以超纯水为阴性对照）、待测模板、阳性对照各2.5μL，加样过程中一次打开一个管盖，加完后立即盖上管盖。
   2. 振荡器涡旋震荡或手指轻弹PCR管，然后10，000rpm以上高速离心30s-1min，去除气泡，然后上机检测；

注4：反应结束后，放置于指定的袋子中及时丢弃。反应后的反应管不应高温灭菌处理，不可打开管盖。

1. 1. 分析实验结果。

【结果分析】

1. 基线设置

反应结束后，仪器自动设置基线范围。如果遇到强阳性样品或3~10个循环内荧光信号波动较大，仪器自动设置的基线范围影响结果分析时，应根据实际情况调整基线范围。

1. 质量控制

阴性对照：CT值应≧45；阳性对照：CT值应≦35。
上述指标有一项不符者，应重新扩增。

1. 结果判断与表述

在阴性对照和阳性对照结果正常的前提下：

1. 1. 待测样品CT值≦40，则可判断该样品检出目标成份。
   2. 待测样品CT值≧45，则可判断该样品未检出目标成份。

待测样品CT值在40-45之间，应重检该样品。重检后，在阴性对照和阳性对照结果正常的前提下，待测样品CT值﹤45，则可认为该样品检出目标成份；待测样品CT值≧45，则可认为该样品未检出目标成份。
【注意事项】

1. 请使用RNase free的离心管、枪头等塑料耗材。
2. 实验室应严格分区操作，分区之间采取物理隔离，各区物品应专用，不得交叉使用，避免污染：

第一区：	样本制备区——核酸模板提取及加入
第二区：	反应区——扩增及反应产物分析

1. 加样时应尽量避免产生气泡，反应前注意检查反应管是否盖紧，以免泄漏，造成污染。
2. 试剂盒内阳性对照应视为具有污染性物质，应注意避免污染其他样本和反应试剂，导致错误检测结果。
3. 不同批号试剂盒组分不得混用。
4. -20℃保存的样本，加样前应室温解冻，在离心机中快速离心20-30s，使管壁和管盖上的液体集中到管底后使用。
5. 实验过程中的废弃物应及时清理，反应管对环境无害，无需灭菌，使用完毕后为避免造成后续污染，应密封丢弃。
6. 工作台及各物品定期用1%次氯*酸钠、75%酒精或紫外灯处理。

【生产企业】
企业名称：上海羽哚生物科技有限公司
电话：400-101-5189   15618329298  
企业网址：http://www.yuduobio.com
【产品标准】Q/GZHFSW 43-2019
【说明书修改日期】2023年09月18日