IncuCyte是一套用于非伤害的、长时间实时动态的活细胞成像分析平台。IncuCyte S3通过将成像系统放置于培养箱中,实时记录分析细胞生长变化,实现多组细胞数天或数十天细胞生长发育、运动、蛋白表达等指标的长期监测,扩充了用户记录和研究细胞生长、细胞行为和细胞形态的途径。
优势:
1.置于培养箱内,长时成像、无需值守
2.高通量及兼容性
3.直观易用的软件操作界面
4.业界认可-超2500文献发表
IncuCyte S3的应用领域(>20种以上应用):
细胞迁移 细胞侵袭 细胞凋亡
细胞质控 细胞毒性 细胞增殖
血管新生 神经生长跟踪 3D肿瘤球体观察
报告基因 T细胞免疫杀伤 细胞趋化
细胞吞噬 单克隆筛选全孔成像干细胞监测
应用举例:
(一) 监测细胞毒性(Cytotoxicity)
发生细胞毒性时,细胞膜会破裂,这时使用非渗透的染料,如YOYO-1或CellTox Green就可以将发生细胞毒性的细胞染色,然后用IncuCyte进行观察。
关键特性:
1)运用NucLight慢病毒试剂标记健康细胞,用细胞非渗透性DNA染料标记发生毒性细胞,同时监测细胞增殖和细胞毒性;
2)可区别细胞毒性(Cytotoxic)和细胞抑制(Cytostatic);
3)可将数据导出到第三方软件,计算EC50和IC50;
4)可通过获取4×、10×或20×的高清晰度相差图像,跟踪细胞形态,确认细胞是否死亡;
5)过程免洗,混合染料,然后读数即可;
6)可观察多种化合物和药物对细胞的毒性作用。
(二) 监测报告基因(Reporter Gene)
细胞用含GFP/RFP的载体转染,GFP/RFP的上游插入需要研究的启动子。这样就可以通过IncuCyte观察GFP/RFP的时序性表达的荧光强度和荧光细胞个数,从而监测通路刺激(如NF-κB)的作用、启动子的活性或报告基因的表达活性。
与传统的终点荧光素酶方法对比,IncuCyte的关键特征在于:
1)数据丰富:96-或384-孔的实时动态数据可获得终点法无法获得的洞察能力;
2)节约成本:无需裂解,无需荧光素酶法需要的终端反应底物,节省时间和花费;
3)方便:实时动态读数使用户能在单个的实验中优化信号窗,无需事先决定何时终止实验;
4)敏感:可得到每个条件下的多个时间点数据,增加了实验的定量性和稳定性;
5)可定制:用户可根据需要定制启动子,修改反应体系,监测药物对报告基因的作用。