碧云天的2019-nCoV Spike Protein RBD ELISA Kit (2019-nCoV Spike Protein RBD Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit),即新型冠状病毒刺突蛋白受体结合域(2019-nCoV Spike Protein Receptor Binding Domain, S Protein RBD)酶联免疫吸附检测试剂盒,是一种用于特异性地高灵敏地定量检测血清、血浆或细胞培养上清液中的S Protein RBD的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高,特异性强,重复性好。多次重复检测结果表明,最小检出量为52pg/ml。板内、板间变异系数(coefficients of variation, CV)均小于10%。
2019年底由新型冠状病毒引起的肺炎疫情,从2020年初开始在全球大流行,感染病例快速上升,引发全球关注。该病毒被世界卫生组织(WHO)命名为2019-nCoV,被国际病毒分类委员会命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)。由新型冠状病毒导致的疾病,被世界卫生组织正式命名为冠状病毒疾病2019 (Corona Virus Disease 2019, COVID-19),通常称为新型冠状病毒肺炎,简称“新冠肺炎”。
新型冠状病毒(2019-nCoV)属于单正链的RNA病毒,与SARS-CoV以及MERS-CoV具有较高的同源性。新型冠状病毒的基因组包含11个基因,其中功能较为重要的5个基因分别是:ORF1ab基因、S基因、E基因、M基因、N基因。刺突蛋白 (Spike Protein)是冠状病毒的主要表面抗原,是分子量约为180kD的I型跨膜糖蛋白,在病毒侵袭宿主细胞过程中发挥重要生物学作用。它是一个同源三聚体,由S1和S2亚基组成。在2019-nCoV中,Spike Protein的蛋白水解是S1和S2亚基激活所必需的。2019-nCoV感染的第一步是Spike Protein与宿主细胞上某些受体的相互作用。S1亚基主要负责识别和结合宿主细胞表面受体,S2亚基序列相对保守并参与病毒与宿主细胞膜融合过程, 被认为是产生中和抗体的重要抗原区。受体结合域(Receptor Binding Domain, RBD)位于S1的C端,可与靶细胞上的受体血管紧张素转换酶2 (Angiotensin-Converting Enzyme 2, ACE2)特异性结合,具有高亲和力和快速结合的能力。研究表明阻断RBD与ACE2的相互作用可抑制病毒感染,这提示RBD可能是2019-nCoV疫苗或治疗的潜在靶点。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中S Protein RBD的浓度,其原理见图1。S Protein RBD特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标准品或样品时,其中的S Protein RBD会与捕获抗体结合。当加入辣根过氧化物酶标记的抗S Protein RBD抗体后,辣根过氧化物酶标记抗S Protein RBD抗体与S Protein RBD结合,形成夹心的免疫复合物。 最后加入显色剂TMB溶液,固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。S Protein RBD浓度与A450值呈正比,通过绘制标准曲线,对照样品吸光度值,即可计算出样品中S Protein RBD浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。
一个包装的本试剂盒,包括标准品检测,可以进行96次检测。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
PS850-1 | 2019-nCoV S Protein RBD抗体预包被板 | 8孔×12条 |
PS850-2 | 标准品稀释液 | 20ml |
PS850-3 | 2019-nCoV S Protein RBD标准品 | 2-4瓶 |
PS850-4 | 辣根过氧化物酶标记RBD抗体 | 10ml |
PS850-5 | 洗涤液(20X) | 30ml |
PS850-6 | TMB溶液 | 10ml |
PS850-7 | 终止液 | 5ml |
PS850-8 | 封板膜(透明) | 2张 |
PS850-9 | 封板膜(白色) | 2张 |
— | 说明书 | 1份 |
标准品4℃保存,1-2周内有效,-20℃保存6个月内有效,试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外,试剂盒其它组分严禁冻存。
更多产品简介及说明书见碧云天官网:https://www.beyotime.com/index.htm