组分 | ||||||||
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应用 | ||||||||
质粒转化、DNA克隆、DNA测序 | ||||||||
储存 | ||||||||
RTS系列感受态为干粉形式,均可室温保存3天,长期保存-20°C(2年)。经Nano E.coli Transfection Reagent溶解后的感受态必须分装后,并于-60°C以下保存。溶解后的感受态细胞避免反复冻融,在-60°C以下可保存6个月。 | ||||||||
操作方法 | ||||||||
1.从-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent彻底融化,放置于冰上。取300 μl Nano E.coli Transfection Reagent加入到一支冻干感受态细胞中,并分装到10支1.5 ml EP管中(每支30 μl),于-60°C以下保存(或立即使用)。 2. 将5 μl连接产物加入到分装的感受态细胞中,轻弹EP管(或枪头轻轻吹打),置于冰上15min。 3. 置于42°C热激1min后,迅速置于冰上急冷2min。 4. 热激完毕后,向上述感受态细胞中加入450 μl不含抗生素的SOC(或LB)培养基,37°C振荡(225 rpm)培养60min。使质粒上抗性标记基因表达,菌体复苏。 5. 取200 μl复苏菌液涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。 |
6. 将平板置于37°C培养,12~18小时后可出现菌落。