产品描述：M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Plus是一种以RNA为模板的DNA聚合酶, 可以长片段mRNA为模板合成dDNA。M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Plus 能够以单链DNA为模板进行延伸，无需添加DNA polymerase。

 

来源：重组大肠杆菌

 

规格：200U/μL

 

活性单位定义：1单位活性定义为37℃、10分钟内，掺入1nmole的dNTP到酸性不溶物质所需的酶量。

 

酶存储缓冲液：50mM Tris-HCl pH 7.5, 25℃, 0.1mM EDTA，100mM NaCl, 0.1% Triton X-100, 1mM DTT, 50%(v/v) Glycerol.

 

配套溶液：5×RT Reaction Buffer. Cat#ON-067, 250mM Tris-HCl (pH8.3, 25℃)，375mM KCl, 15mM MgCl₂, 50mM DTT.

 

相关产品推荐：5×RT Reaction Buffer, Cat#ON-067; M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Minus，Cat#ON-047; RNase inhibitor, Cat#ON-039

操作要点：
 

反应体系：

1. 在合成第一链DNA之前，将引物（约0.5μg）与模板（最多2μg）预先加热70℃ 5min，冰浴5min。加热可以打开模板中的二级结构，冷却是阻止二级结构的再次形成。

2. 向已经退火的引物/模板添加下述溶液：

M-MLV reverse transcriptase, RNase H plus	50-200U
5×RT Reaction Buffer	5μL
RNasin	20U
dNTP (10mM each)	1.25μL
Total	25μL

3. 37℃ （若使用随机引物）60min，或者42℃（若使用其它引物）60min. 延伸温度可以在37℃和42℃之间优化。
 

储藏温度：-20℃

质控检测：无DNase、Nickase、RNase污染

纯度：SDS-PAGE纯度：大于95%

参考文献：
 

1. Yu Chen， Weiguo Xu，Qining Sun, Biotechnol Lett. 31, 1051–1057 (2009).

2. Monica J. Roth, Naoko Tanese, and Stephen P. Goff, The Journal Of Biological Chemistry. 260, 9326-9335(1985).