检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被NO还原酶（NOR）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的NO还原酶（NOR）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。样品收集、处理及保存方法1.样本不能含叠氮NA（NaN3），因为叠氮NA（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。3.土壤萃取液或其它相关样本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测。4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3.浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，最终结果乘以 5 才是样本实际浓度。4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5.所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8 U/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。洗板方法1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。操作步骤1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；3.样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；空白孔不加。4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。6.每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。7.每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。结果判断绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。试剂盒性能1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值，大于等于 0.9900。2.灵敏度：最低检测浓度小于 0.1 U/mL。3.检测范围：0.1 - 8 U/mL。4.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。5.重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。6.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。7.有效期：6 个月免责声明1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。