一、产品介绍

ExoCoupl^® 外泌体表面修饰生物正交偶联试剂盒，是恩泽康泰开发的基于生物正交反应实现外泌体表面修饰的试剂盒。首先通过室温生物正交反应在外泌体表面添加活性基团，再通过活性基团与叠氮键（N3）的反应，将与叠氮偶联的小分子/多肽/核酸等有效成分共价结合到外泌体外表面，实现外泌体的表面修饰。叠氮偶联的有效成分合成比较方便，无电性、分子类型等限制，合成后使用本试剂盒即可连接在外泌体表面。

本偶联试剂盒操作便捷，仅需2步共孵育和2步纯化操作，外泌体表面装载效率高可媲美脂锚共孵育，但非特异性吸附更低。

二、产品用途

1、治疗性小分子、小核酸、多肽等有效成分的外泌体装载；

2、提高外泌体靶向性的靶向肽表面装载，比如脑神经靶向肽RVG、缺血心肌靶向肽IMTP、泛癌或炎性细胞靶向肽iRGD等。

三、产品规格

四、产品优势

1、操作便捷，仅需2步共孵育和2步纯化操作，即可完成外泌体表面装载；

2、外泌体表面装载效率高，比如对于靶向肽外泌体表面装载，本试剂盒装载阳性率可媲美脂锚共孵育。

3、本试剂盒采用2步法标记的方式，负载目的分子非特异性吸附更低，背景噪音更低。

4、本试剂盒不限制负载的目的分子种类，用户自备的N3标记的小分子、多肽、核酸均可以，且合成便捷，当然目的分子小于4KD负载效率更高，为了方便测定载量建议同时带上N3和FITC/FAM等荧光基团。

五、产品数据

首先合成N3和FITC标记的脑神经靶向肽RVG（FITC-RVG-K-N3），使用本正交偶联试剂盒（Cat#EC-01-01）对恩泽康泰货架产品293F外泌体（Cat#CTE-06）按照说明书处理，以将RVG靶向肽修饰在外泌体表面。同时，另取一份用293F外泌体（Cat#CTE-06），使用RVG脂锚靶向肽（Cat#EA-06-1）将携带FAM荧光的RVG靶向肽同样展示在外泌体表面。

1、负载率对比：通过NanoFCM检测RVG多肽负载阳性率（负载上RVG的外泌体颗粒数/所有外泌体颗粒数）。

如下图所示，结果显示：1）2种方法均可将RVG多肽修饰到外泌体表面，且负载阳性率相当；2）正交偶联试剂盒负载时本底信号更低。

2、将上述2种方法得到的RVG修饰的293F外泌体，脂锚方法得到外泌体命名为“脂锚RVG-外泌体”，正交偶联方法得到外泌体命名为“偶联RVG-外泌体”，未进行RVG修饰的外泌体命名为“对照293F外泌体”，将上述3组外泌体进行红色荧光标记后，分别处理小鼠脑神经瘤细胞Neuro2a细胞和前列腺癌细胞，细胞流式检测细胞对外泌体摄取率。

结果显示：2种方法得到的表面修饰有脑神经元靶向肽RVG的外泌体均可提升Neuro2a细胞对外泌体的摄取效率；而另外一组不表达RVG受体蛋白的前列腺癌细胞对照，则没有显示出摄取率差异。

注：

1.避免反复冻融。

2.非产品质量问题，不接受退换货。

3.验证数据仅供参考，不作为交付标准。

4. 用户需要自行合成带荧光基团且叠氮键偶联的药物分子，若合成有困难可以联系技术支持为您推荐合成供应商；

5. 建议目的分子的分子量MW不大于4 kD，以得到最佳的偶联效果。若分子量较大，可以在实验步骤5中适当增加投量，初始建议的投量计算方式为MW*10/4000 μl （N3-目的分子-FITC的浓度为1 mg/ml）。

6. 袖珍柱最大上样体积不超过600 μl。 

7. 液体溶液使用前请震荡混匀，操作时注意避光。

8. 保质期：1年。

正交偶联方式修饰外泌体相关文献：
Haroon, K., Ruan, H., Zheng, H., Wu, S., Liu, Z., Shi, X., Tang, Y., Yang, G. Y., & Zhang, Z. (2023). Bio-clickable, small extracellular vesicles-COCKTAIL therapy for ischemic stroke. Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society, 363, 585–596.