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| 组分 | 规格（200次） |
| RNase A（100 mg/mL） | 60 μL |
| Buffer BL | 60 mL |
| Buffer P1 | 60 mL |
| Buffer P2 | 60 mL |
| Buffer P3 | 80 mL |
| Buffer W1 | 2×72 mL |
| Elution Buffer | 25 mL |
| 吸附柱EC | 200套 |
保存条件
常温（10~25℃）保存12个月，加入RNase A后的Buffer P1置于2~8℃保存。
产品简介
本试剂盒采用改良的SDS-碱裂解法，结合先进的硅胶膜吸附技术，可达到快速纯化质粒DNA的目的。适用于从1~4 mL的细菌培养物中提取多至20 μg高纯度的质粒DNA，提取的质粒DNA可用于酶切、PCR、测序、细菌转化、体外转录与翻译等分子生物学实验。
产品特点
- 操作简便：在30 min内可完成多个样品的质粒DNA提取；
- 高效：可提取菌体85%以上的质粒DNA。
本品适用于从1~4 mL的细菌培养物中提取多至20 μg高纯度的质粒DNA。
注意事项
- Buffer P1在使用前先加入RNase A（试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀后置于2~8℃保存；
- 第一次使用前，向Buffer W1中加入无水乙醇，加入量参见瓶上标签；
- 当环境温度低时，Buffer P2中的SDS可能出现浑浊或析出沉淀，将其37℃水浴加热几分钟即可恢复澄清，请勿剧烈摇晃，以免形成泡沫；
- Buffer P3中含刺激性溶液，操作时要戴乳胶手套、口罩和眼镜。若沾染皮肤、眼睛应立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时及时就医；
- 各溶液使用后请立即盖紧盖子；
- 质粒提取得率和质量与宿主菌的种类、质粒拷贝数、质粒的稳定性等因素有关。
使用方法
- 向吸附柱EC中加入250 μL Buffer BL，12,000 ×g离心1 min，活化硅胶膜；
- 取1~4 mL过夜培养的菌液，12,000 ×g离心1 min，收集菌体，尽量吸除上清；
- 加入250 μL Buffer P1（请先检查是否已加入RNase A）重悬菌体沉淀（若菌体沉淀未彻底悬浮会影响裂解效果，导致提取得率和纯度偏低），涡旋震荡至无菌块为止；
- 加入250 μL Buffer P2，温和地上下翻转6~8次，使菌体充分裂解；
- 加入350 μL Buffer P3，温和地上下翻转6~8次，充分混匀（此时会出现白色絮状沉淀），12,000 ×g离心10~15 min；
- 小心吸取上清，将上清转入吸附柱EC中（注意不要吸出沉淀），12,000 ×g离心1 min，弃废液，将吸附柱EC放回空收集管；
- 在吸附柱EC中加入700 μL Buffer W1（请先检查是否已加入指定体积的无水乙醇）12,000 ×g离心1 min，弃废液；
- 重复步骤7；
- 将吸附柱EC放回空收集管中，12,000 ×g离心2 min；
- 取出吸附柱EC，放入干净的1.5 mL离心管中，20~25℃静置2 min，使残留的乙醇挥发。在吸附膜的中间部位加入35~50 μL Elution Buffer（60~65℃预热Elution Buffer效果更好），20~25℃静置2 min，12,000 ×g离心2 min。如需较多量DNA，可将得到的溶液重新转入吸附柱EC中，离心2 min。
常见问题与解决办法
Q1：质粒DNA产量低？
A1：
- 质粒拷贝数低。载体因拷贝数差异会造成质粒产量明显的波动。高拷贝数的载体常有2 ~3倍的产量波动（每毫升培养过夜的菌液，高拷贝数的质粒载体产量为3 - 16 μg）。长片段质粒和表达型载体常以中低拷贝数为主，每毫升菌液的产量约为0.5~2 μg；
- 低拷贝质粒：pBR322, pACYC及其衍生载体，pSC101及其衍生载体，SuperCos, pWE15；
- 高拷贝质粒：pTZ, pUC, pBS, pGM-T。
- 菌种问题。菌种保存过程中存在质粒丢失现象，培养细菌前最好先划线活化，以稳定产量；
- 细菌未充分裂解。细菌须在Buffer P1/RNase A 中充分重悬，成团的细菌因无法裂解会降低产量；
- 试剂准备有误。Buffer P2若有沉淀析出需加热溶解，Buffer W1加入乙醇体积不准确；
- 洗脱效率低。将Elution Buffer 预热至60~65℃，并进行二次洗脱。
Q2：质粒DNA中有基因组DNA污染？
A2：
- 菌液培养时间太长。菌液培养时间需控制在12 ~16 h；
- 裂解问题。加入Buffer P2时，必须轻柔颠倒混匀；处理多个样品时，加入Buffer P2时算起，总时间不要超过5 min。