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kuglemeiers-Sphericalplate 5D 6孔细胞培养板操作指南
Sphericalplate 5D 6孔细胞培养板的特点：
- 易于使用的球形形成平台
- 形成标准化且尺寸均匀的球体
- 便于扩大规模，且球体质量不受损
1 个Spherical 5D，6 个孔，每个孔 3364 个微孔＝ 每块板 20184 个球体
Sphericalplate 5D 手册简述-易于使用
第一步
准备
用 2 毫升培养基 准备功能性培养孔
第二步
加入细胞
加入 1 毫升单细胞悬浮液
第三步
培养
孵育
Sphericalplate 5D - 使用说明
初始细胞接种
1 在细胞接种前，使用 3 毫升冲洗培养基预先湿润Spericalplate5D 的功能性小孔。冲洗液可以是含血清或不含血清的培养基，或者是普通的 PBS。切勿让小孔干燥。
注意：由于有涂层，介质通常会在各处均匀流动，气泡会自动释放。根据所使用的介质，一些气泡可能会留在微孔内。如果是这样，通常可以通过轻轻敲击
Spericalplate5D或以1000 g的离心力离心1分钟来清除气泡。强烈建议通过明场显微镜进行目视检查，以确保没有气泡留在微孔内。
2 计算每个微孔所需细胞的数量，并重新悬浮细胞，考虑到每个孔至少会接种 3 毫升培养基。
由于细胞在重力作用下进入微孔，务必确保在短时间内形成均匀分布的细胞悬液。细胞悬液混合得越好，球体就越规则。
注意：Spericalplate 5D的一个功能孔包含3364个微孔。该板允许使用各种不同大小的标准化球体。平均而言，要使球体直径达到100微米，每个微孔需要150-600个细胞。对于快速生长的细胞，建议减少接种细胞数量，例如每个微孔50个细胞。要创建更大的球体，可以在每个微孔中加入更多的细胞，例如每个微孔1500个细胞。
为获得无细胞聚集的均匀单细胞悬液，建议在接种前使用细胞过滤网（例如 70 微米）。例如，在等待细胞脱落（例如在胰蛋白酶处理期间）时，如果通过击打或摇晃培养瓶来避免细胞受到搅动，肿瘤细胞聚集的情况会减少。
3 接种后，按照合适的标准方案进行孵育。无需进一步离心。
更换培养基
- 球形体形成后，将移液管放置在培养基表面以下（远离细胞球体），以免产生涡流， 小心吸出上清液。微孔的高度设计是为了在更换培养基期间保留球形体， 但应小心不要扰动它们。 注意：移液操作必须非常缓慢，否则可能会产生冲击波，将球形体从原始的微 孔中推出，并使其从一个微孔移动到另一个微孔。这应通过显微镜进行监测。 收集球体
- 用移液管进入孔板前将孔板倾斜 20 至 30 度。使用移液管自上而下冲洗孔板，并将含有球体的上清液总量收集到适当的容器中，以进行进一步分析。如果要在 孔板内进一步培养球体，避免倾斜整个孔板，直接进行冲洗程序。请注意，在 收获数量上可能会有少量损失；如有需要，可以用培养基进一步冲洗孔板以收 获剩余的球体。
培养板规格：5D 球形培养板是一个 6 孔板，标记为 A1 - A3 和 B1 - B3， 每个孔含有 3364 个微孔。一个培养板总共包含 20184 个标准微孔。
培养条件：5D球形培养板中特定细胞的培养条件需要单独确定。例如，培养基中 的氧气张力取决于培养基的高度，考虑到球体核心的氧张力球体大小可能会达到临界尺寸。因此，要根据您细胞的代谢情况调整培养基的量。
每个孔的最终体积至少为3 毫升是一个初始建议。 仅供研究使用，不用于临床诊断或治疗.
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