【储存条件及有效期】 

保存条件：-25 °C~ -15 °C，有效期为6个月； 运输条件：试剂盒需在-15℃以下运输；

【检验方法】  操作步骤 

1. 核酸提取 采用核酸提取试剂盒或者自动化核酸提取仪提取各类样本中的待检 DNA/RNA，若无需立即使用，需要放置-80℃保存。 

2. 试剂准备 取出试剂盒中引物混合液和酶混合液置于室温溶解，混匀后瞬时离心备用。 计算样本、阴性和阳性对照的数量，记为N，按照N+1的数量配置混合液 （每个样本需7μL引物混合液 +11μL酶混合液），充分混匀后瞬时离心备用。 将混匀好的反应混合液按每个样本18μL分装至相应的PCR管中，转移至样 本制备区。 

3. 加样 向分装好的PCR反应管中分别加入2μL样本提取核酸、无酶水阴性对照和 阳性对照（单个反应总体积共20μL）。加样完成后，盖紧PCR管盖，短暂 离心，确认消除气泡后转移至扩增区进行PCR反应。

4. qPCR反应 将样本放入扩增仪，设置样本名称、阴性对照和阳性对照，荧光通路选 择SYBR。

【注意事项】 

1. 酶混合物及引物混合物配制成的qPCR反应液对温度敏感，容易失 活，使用时应置于冰上，反复冻融不超过5次；

2. 本品保存不当或者运输不当可能会导致试剂失活，出现假阴性的结 果；

3. 不同核酸提取方法提取效率不同，可能会导致假阴性的结果；

4. 病原体流行株变异可能导致假阴性的结果；

5. 本试剂盒仅用于科研用途，使用前请仔细阅读说明书；

6. 实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，实验 人员必须进行专业培训，实验过程严格分区；使用一次性消耗品， 各区各阶段消耗品不得混用。