产品描述 Balance CD 293 培养基适用于悬浮培养条件下的HEK293细胞（如293-F,293-T, Expi-293F 等）的高密度生长和瞬时转染表达。 Balance CD 293 培养基含有细胞生长所需的全部营养成 份，无需添加任何添加物即可使用。（注意：此培养基不包含抗生素以及血清） 产品特点  瞬时转染专用培养基，适用于HEK293细胞高密度悬浮培养  无蛋白、无动物源、化学成分限定  即用型完全培养基,无需添加额外成分 基础参数 外观：澄清透明红色液体 渗透压：275±15 mOSM pH:6.9-7.4 无菌检测:无菌 内毒素： <5 EU/mL 储存条件：2-8℃，避光 效期：12个月 产品用途：仅用于科学研究，不适用于人类或动物的诊断和治疗 产品使用方法 细胞驯化 1 ）直接驯化 大部分情况下，培养于其他培养基中的细胞，可以直接适应Balance CD 293 medium，只要 按照日常传代方式（稀释）更换培养基即可。 2）渐进式驯化 注意：选用低代次、处于对数生长期的细胞进行驯化 ①在原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代2到3次至细胞生长稳定，当细胞密度达到 2x106 cells/ml后进行传代，传代细胞密度控制在0.5-0.6×106 cells/mL，5-10%血清的传统培养 基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为75:25； ②将细胞置于37℃，5% CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养； ③当细胞密度3-4天后达到3x106 cells/ml且细胞活率>90%，传代时5-10%血清的传统培养基或其 他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为50:50，细胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。 如细胞生长慢，可离心上清，留20%条件培养基，加入80%的5-10%血清的传统培养基或其他 无血清培养基与Balance CD 293 培养基比例为75:25的混合培养基，继续培养； ④重复步骤③逐步增加Balance CD 293培养基所占的比例(5-10%血清的传统培养基或其他无 血清培养基与Balance CD 293 培养基的比例为25:75至10:90）直到100%的Balance CD 293 培养基； ⑤经过在100%的 Balance CD 293 培养基中的几次传代培养，传代后3-4天细胞的密度可以达 到2-3×10 6 cells/mL，细胞活率大于90%，这说明细胞已经完全适应了Balance CD 293 培养基。 之后进行细胞的传代培养时，细胞的起始密度可以降到0.3×106 cells/mL，一般传代2-3次后再 进行转染实验。 注意: 一般细胞驯化过程中，前三代细胞的状态可能不是很好，但一般从第四代开始状态会有 改善 细胞传代 1） 取细胞培养样品，人工或仪器测定细胞密度以及活率； 2） 计算传代所需的细胞用量，建议起始细胞密度为0.2-0.4×106 cells/mL。建议复苏的细胞至 少培养两代后再用于其他用途。传代培养体积建议为15-20 mL（100 mL的培养瓶）或50-60 mL （250 mL 的培养瓶）； 3） 将细胞置于37℃，5%CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养，3-4天传代一次。 细胞转染在Balance CD 293培养基中，采用商业化转染试剂（例如 Gibco 293Fectin 细胞复苏 1） 迅速取出冻存的细胞，在37℃水浴条件下进行解冻（可以在水中轻轻晃动，时间控制在60s 以内）； 2） 轻轻地混匀细胞并将融化的细胞全部移至15mL无菌离心管中，逐滴加入10 mL预热到37℃ 的培养基，离心换液（100 g，5 min）去除全部上清，加入新鲜培养基重悬，使得细胞密度达 到0.4-0.6×106 cells/mL； 3） 将细胞置于37℃，5%CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养； 4）2-4天后通过人工或仪器测定细胞的密度以及活率，如果细胞密度达到1.0×106 cells/mL，活 率达到85%以上则可进行传代培养； 5）如果细胞密度低于1.0×106 cells/mL，则建议对细胞进行离心（100 g，5 min），然后重悬 于20-30 mL 的新鲜培养基中使得细胞密度为0.4-0.6×106 cells/mL 左右，并继续培养至细胞正 常生长则可进行传代培养。 细胞冻存 1） 冻存细胞时，要选择处于对数生长期同时细胞活率在90%以上的 HEK293 cells ； 2） 事先计算好冻存的细胞管数和所用的培养基的体积； 3） 制备细胞冻存液：46.25% 的新鲜Balance CD 293培养基+46.25% 条件Balance CD 293 培养基，混合之后再加入7.5% DMSO，存放在4℃，一般为当天用当天制备； 4） 对细胞样品进行计数； 5） 取样计数，以100 g，3-5 min的条件离心收集细胞，然后用冻存培养基（ 4℃ ）重悬细胞， 使得细胞密度为 5-10×106 cells/mL； 6） 取样计数，调整细胞密度；迅速分装细胞到无菌的冻存管中，一般2 mL 的冻存管放1-1.5 mL， 贴好标签，密封； 7） 将细胞冻存管放到程序降温冻存盒（注意填充异丙醇，4℃预冷）中，置于-80℃ 冰箱(每分 钟下降1℃)，过夜存放后将细胞转入液氮罐中进行保存。