PBMC（Peripheral Blood Mononuclear Cells），即外周血单个核细胞，是血液中的一种重要细胞群体，主要由淋巴细胞（包括T细胞、B细胞和NK细胞等）、单核细胞和树突状细胞等组成。它们在人体的免疫系统中扮演着关键角色，参与免疫应答和免疫调节。PBMC可从健康人的单采样本，通过密度梯度离心工艺得到，主要包括淋巴细胞和单核细胞。主要用于免疫学研究、传染病研究、肿瘤免疫、疫苗研发、毒理学研究以及基于PBMC的多能干细胞研究的个体化治疗。

• 免疫调节药物的临床前药效学和药代动力学研究
• PD-1/PD-L1单克隆抗体临床前安全性和有效性评价
• 双特异性抗体临床前研究
• 人源化肿瘤免疫模型（PDX）小鼠药效学研究
• 生物制剂药物的免疫毒性和免疫原性研究
• 纳米抗体药物临床前评估
• 疫苗安全性和免疫调节治疗效果评价
• 药代动力学研究
• 中药的体外药效学研究

产品规格：

服务优势

冻存PBMC复苏操作

外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC），其主要包括两大类细胞，分别是淋巴细胞（Lymphocyte）和单核细胞（Monocyte），其中淋巴细胞又包括T淋巴细胞，B淋巴细胞和NK细胞。泽医提供从Leukopak中使用密度梯度离心法分离纯化的PBMC。

一、试剂耗材

²  复苏培养基（10%灭活FBS的DMEM/RPMI-1640完全培养基）；

²  实验用培养基

²  移液枪；

²  15ml离心管；

²  水浴锅；

²  75%酒精；

²  离心机；

²  计数仪

二、细胞解冻

1、将完全培养基在37℃水浴锅中预热；

2、取15mL离心管加入3-5mL预热的完全培养基置于生物安全柜中备用；

3、从干冰/液氮中取出细胞，将冻存管尽可能多的浸入液面以下（至少冻存液部分全部在液面以下），确保管盖在液面上方，在37℃水浴锅中轻柔水平画圈晃动冻存管使其快速融化，直到管内只剩小片冰晶，融化过程中可随时观察融化情况，大约耗时120s；

4、用75%酒精消毒冻存管外部后，将冻存管拿进生物安全柜中使用无菌纸或无菌布擦干管壁，然后开盖，将管内细胞悬液轻轻吹打混匀；

5、将细胞悬液滴加至已准备好完全培养基的15mL离心管中，吸1mL培养基润洗一下冻存管，然后盖上盖子颠倒混匀；

6、室温下，以300g的转速离心10分钟，转移上清至另一个干净的离心管中，以防离心后细胞数量发生较大偏差；

7、加入2mL实验所需培养基将细胞重悬，然后定容至5mL,混匀准备计数；

8、取10uL细胞悬液，按1:1混合AO/PI后使用计数仪计数或使用台盼蓝染色然后使用血球计数板计数，记录细胞活率和细胞密度；

9、下面提供血球计数板的计数办法：

N =血球计数板的4角大方框所数的所有细胞个数

d =稀释倍数

细胞数量/管=N÷4×2×d ×    mL=     × 10⁴

细胞活率=未被台盼蓝染色的细胞个数÷细胞总数×100%=    %

10、计数之后根据实验需求，添加实验用培养基调整您需要的细胞密度进行接下来的实验。

三、备注

1、若您需要再次洗涤细胞，重复步骤6-8，每次洗涤会造成10-15%的细胞损失；

2、若离心后细胞数量低于预期，将步骤6的上清液再次离心，可使用400g/10min离心条件离心后重悬计数；