一步克隆技术是一种简单、快速并且高效的DNA无缝克隆技术，可快速将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。使用任意方式将载体进行线性化，在插入片段正/反向扩增引物5'端引入线性化载体的末端序列，使得PCR产物5'和3'最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列 （15 - 20 bp）。这种两端带有与载体末端一致序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后，在重组酶的催化下，50℃反应30 - 60 min即可进行转化，完成定向克隆。