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SPIDER邻近标记 | DNA Pull Down试剂盒
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品牌 ABCODE
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更新 2025-08-12 15:02
 
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这款产品用于DNA结合蛋白/靶标蛋白的筛选和发现,是一款DNA结合蛋白鉴定的有效工具。

SPIDERTM邻近标记 | DNA Pull-Down试剂盒用于DNA结合蛋白/靶标蛋白(Prey)的筛选和发现。将生物素标记的DNA与细胞裂解液共同孵育,从而形成DNA-蛋白质复合物,同时生物素与SAm-PupE靠近并结合,在PafA酶的催化作用下,PupE的C末端会与Prey蛋白表面的赖氨酸残基共价连接,从而将DNA与Prey之间的非共价结合相互作用转换为SAm-PupE与Prey的共价连接。通过生物素琼脂糖(Biotin-beads)捕获SAm,从而实现Prey的富集。通过质谱技术检测目标DNA是否与某些蛋白有相互作用。

SPIDER验证大肠杆菌蛋白质RutR与DNA相互作用

在大肠杆菌中,蛋白质RutR是嘧啶分解代谢中重要的调控元件。已有研究报道,RutR能够与一段16 bp的DNA基序结合,我们选取两段RutR结合的基因进行验证。将RutR结合靶标的反向互补序列的3'端带上生物素修饰,由公司合成双链DNA,以此作为Bait与SPIDER体系与裂解液进行反应。为了验证SPIDER反应的特异性,加入10倍浓度的没有生物素标记的DNA探针竞争结合RutR。结果显示,在PafA的作用下,RutR被共价连接SAm-PupE,分子量增加约18 kDa,形成RutR-SAm-PupE复合体,而加入竞争DNA后,RutR-SAm-PupE复合体被抑制90%左右,说明SPIDER体系能够特异性的识别生物素化的Bait。