CUT&Tag 是一种新的实验方法,用于研究组蛋白修饰和一些转录因子的基因组定位,从而揭示蛋白与DNA之间的相互作用或者鉴定感兴趣蛋白的DNA结合位点。
MNase-Seq和ATAC-Seq是把开放染色质作为研究对象,因此相当依赖于染色质的开放性。不同于这两个方法,CUT&Tag利用基于抗体的酶靶向特定的组蛋白修饰或蛋白,以揭示特定于这些感兴趣位点或蛋白的染色质结合信息。
CUT&Tag基于与ChIP-Seq相同的原理,但是对实验方法进行了一些相应的修改。在CUT&Tag中,新鲜的(未冷冻的)未固定的细胞与刀豆蛋白A磁珠结合,在细胞的原生状态下(native state)进行抗体孵育,不需要ChIP-Seq实验中固定染色质,超声处理和免疫沉淀的步骤。抗体结合后,染色质被消化,NGS建库通过使用预先接好adapter的proteinA - Tn5 (pA-Tn5)转座酶进行标记,一步完成。
与ChIP-Seq相比,CUT&Tag的起始材料更少,所需要的时间更短,产生结果更快,质量更高,而且能够以更低的测序深度进行稳健的分析,从而节省时间和金钱。
CUT&Tag-IT® Assay Kit优势:
- 单次实验最少可使用5,000个细胞
- 提供完整的试剂和优化方案(excluding CUT&Tag-IT Core Assay Kit)
- 适用于组蛋白标记和一些转录因子
- 建库步骤简单成本降低
- 背景低因此可以降低测序深度
- 没有甲醛交联造成的假阳性结果