Annexin V-FITC / DAPI细胞凋亡检测试剂盒保存条件
2~8℃可保存 1 年。Annexin V-FITC 禁止冷冻保存。
实验原理
Elabscience®自主研发的 Annexin V-FITC/DAPI Apoptosis Kit，可用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的 凋亡。
Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 (PS) 有高度亲和力。当细胞发生 凋亡时，膜内侧的磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻到膜表面，而被荧光染料 FITC 标记的 Annexin V 结合，可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。
由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，而 4',6-二脒基-2-苯基吲哚er盐酸盐（4',6-Diamidino-2- Phenylindole, DAPI）可与双链 DNA 特异性结合并产生强烈的荧光，与 Annexin V 搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。
本试剂盒检测喜树碱诱导的 Jurkat 细胞凋亡效果如下图所示：产品参数：

应用类型	细胞凋亡-Annexin V
检测方法	荧光
样本类型	细胞
检测时间	40min
检测仪器	流式细胞仪
荧光	FITC
Ex/Em (nm)	490/530
Channel set	FITC
自备试剂	PBS(E-BC-R187), 去离子水
保存温度	2~8°C, shading light
运输条件	冰袋
保质期	12 months

试剂配制
1×Annexin V Binding Buffer：取 1 mL Annexin V Binding Buffer (10×)加入 9 mL 去离子水中混匀。
实验操作
一步法
1． 细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 ×g 离心 5 min，弃上清，收集细胞，PBS 洗涤一次，轻轻重 悬细胞并计数。
2． 取 1~5 × 105 重悬的细胞，300 ×g 离心 5 min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加 入 500 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer 重悬细胞。
3． 细胞悬液中加入 5 μL 的 Annexin V-FITC Reagent 和 5 μL 的 DAPI Reagent (25μg/mL)。
4． 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。
5． 立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于 1 小时内完成检测。
注：流式细胞仪检测时 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，DAPI 优先选 DAPI 通道，其次是 Pacific Blue 通道。
两步法
1． 细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300 ×g 离心 5 min，弃上清，收集细胞，PBS 洗涤一次，轻轻重 悬细胞并计数。
2． 取 1~5 × 105 重悬的细胞，300 ×g 离心 5 min，弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次，离心后弃上清，加 入 100 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer 重悬细胞。
3． 细胞悬液中加入 2.5 μL 的 Annexin V-FITC Reagent 和 2.5 μL 的 DAPI Reagent (25μg/mL)。（由于两 步法分辨率更高，染色液用量减半依然可得到媲美一步法的效果；用户亦可根据自己的模型进行滴 定后加入适量的染色液，用更少的量获得高质量的结果。）
4． 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 15~20 min。
5． 加入 400 μL 稀释的 1 × Annexin V Binding Buffer，混匀样本。
6． 立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于 1 小时内完成检测。
注：流式细胞仪检测时 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道，DAPI 优先选 DAPI 通道，其次是 Pacific Blue 通道。
注意事项
1. 本产品仅供科研使用。
2. 检测贴壁细胞时，需收集诱导凋亡后产生的悬浮细胞，并与后续收集的贴壁细胞一起检测。
3. 应尽量避免消化贴壁细胞带来的机械损伤。同时，胰酶的消化液中应尽量不含 EDTA，因为 EDTA 会影响 Annexin V 与磷脂酰丝氨酸的结合。
4. 如果使用含 EDTA 的胰酶，收集细胞后应充分清洗，确保 EDTA 被去除干净。
5. 染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
6. 荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽 量注意避光保存。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作Annexin V-FITC / DAPI细胞凋亡检测试剂盒——北京百奥创新科技有限公司，欢迎咨询选购。