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Gibco11131D/11132D用于T细胞扩增和活化的 Dynabeads™人T活化剂 CD3/CD28
名称 | 品牌 | 货号 | 规格 | 保存 |
用于T细胞扩增和活化的Dynabeads™人T活化剂CD3/CD28 Dynabeads"Human T-Activator CD3/CD28 for T Cell Expansion and Activation | Gibco | 11131D | 2mL | 2~8°C |
11132D | 5x2mL |
一、产品概述
Gibco™ Dynabeads™人T活化剂CD3/CD28是一种磁珠偶联抗体复合物，用于高效激活和扩增人T细胞。该产品通过模拟天然抗原呈递过程（提供CD3和CD28信号），实现T细胞的非特异性活化，广泛应用于免疫治疗研究（如CAR-T、TCR-T）、肿瘤免疫学和体外T细胞功能研究。
二、产品的优势
•无需饲养层细胞即可活化T细胞
•活化细胞仍保留体内类似功能
•获得较大的可重现性，不会受到可溶性抗体或有丝分裂原污染
•实现从100倍到1000倍的T细胞扩增
三、核心特点
1.双信号激活
磁珠表面共价偶联抗CD3（刺激TCR复合物）和抗CD28（提供共刺激信号），协同促进T细胞活化和增殖，避免细胞凋亡或耐受。
2.高纯度与一致性
均一的4.5μm磁珠，表面抗体比例经过优化（CD3:CD28 = 1:1），确保批次间稳定性。
3.无酶解需求
无需使用胰蛋白酶或其他酶去除磁珠，减少对细胞的损伤（传统方法需磁珠分离）。
4.兼容多种应用
适用于静止T细胞、PBMCs或全血中的T细胞扩增，支持无血清培养基条件。
四、应用领域
•CAR-T/TCR-T细胞制备
•肿瘤微环境研究
•自身免疫疾病模型
•疫苗开发中的T细胞应答评估
五、质量控制
1.无菌性：通过内毒素检测（<1 EU/mL）和微生物污染测试。
2.性能验证：每批次经流式细胞术检测，确保≥90%的CD4⁺/CD8⁺T细胞活化（标志物如CD25、CD69上调）。
六、产品规格
货号 | 11131D | 11132D |
细胞类型 | T 细胞（全细胞群） | |
认证/合规 | ISO9001和ISO13485 | |
克隆性 | 单抗 | |
浓度 | 4×10 7 Beads/mL | |
描述 | Monoclonal anti-human CD3 and CD28 antibodies covalently bound to DynaBeads magnetic Beads | Monoclonal antibodies covalently bound to DynaBeads magnetic Beads |
最终产品类型 | 细胞 | / |
适用（设备） | DynaMag™ Magnet | |
宿主种属 | 小鼠 | |
分离技术 | Magnetic Beads | |
产品线 | DYNAL™、Dynabeads™ | |
数量 | 2mL | 5 x 2mL |
反应性 | 人 | |
调控状态 | For Research Use Only | |
样品类型 | 细胞培养，PBMC | |
有效期 | 24个月 | |
运输条件 | 室温 | |
表面功能基团 | 环氧树脂 | |
目标种属 | 人 | |
均一性 | Monosized 4.5 μm (CV <5%) | |
容积（公制） | 2 mL | 5 x 2mL |
颜色 | Brown | |
直径（公制） | 4.5 μm | |
适用于（应用） | Activation and Expansion of T-cells | |
材质 | 磁性聚苯乙烯 | |
产品类型 | 抗体包被微球 | |
Unit Size | Each | |
七、产品使用说明
1、实验前准备
（1）、试剂与材料
•Dynabeads CD3/CD28（11131D或11132D）
•T细胞来源：外周血单个核细胞（PBMCs）、纯化T细胞或全血
•培养基：RPMI 1640 + 10% FBS（或无双抗的X-VIVO 15等无血清培养基）
•细胞因子：重组人IL-2（推荐终浓度100–300 IU/mL）
•辅助试剂：DPBS（无Ca²⁺/Mg²⁺）、0.4%台盼蓝（细胞活性检测）
（2)、 磁珠预处理
•轻柔混匀：取出磁珠瓶，轻摇30秒使磁珠均匀悬浮（勿涡旋）。
•洗涤（可选）：若需去除保存液，用1mL DPBS重悬磁珠，置于磁力架1分钟，弃上清，重复1次后重悬于培养基中。
2、操作步骤
（1）T细胞活化（Day 0）
①.细胞计数：分离PBMCs或纯化T细胞（如用CD3/CD28 MicroBeads阴性分选），调整细胞密度至1–2×10⁶/mL。
②.磁珠与细胞共孵育：
•比例推荐：
常规活化：磁珠:细胞= 1:1（如1×10⁶细胞+1×10⁶磁珠）
高纯度T细胞：可降至1:0.5
低反应性细胞（如肿瘤浸润淋巴细胞）：可增至1:2~1:3
•混合体系：将磁珠与细胞在培养基中混合，轻柔吹打均匀。
③.培养条件：37°C、5% CO₂培养箱中静置培养24–48小时。
④.观察活化标志物：24小时后可检测CD25/CD69表达（流式细胞术）。
（2）T细胞扩增（Day 2–14）
①.补充IL-2：激活24小时后添加IL-2（终浓度100–300 IU/mL）。
②.换液与维持：
•每2–3天半量换液（离心后弃去一半培养基，补充新鲜含IL-2培养基）。
•维持细胞密度在0.5–2×10⁶/mL（避免过度拥挤）。
③.磁珠去除：
•扩增完成后（通常Day 5–7），将培养物置于磁力架1分钟，吸出上清中的细胞，弃去磁珠。
3、关键优化参数
（1）磁珠比例：初次实验建议测试1:1、1:2、1:3比例，选择扩增效率最佳者。
（2）IL-2浓度：过高可能导致Treg细胞扩增，可尝试50–500 IU/mL梯度优化。
（3）培养基选择：无血清培养基（如X-VIVO 15）可减少批次差异，但需预试细胞适应性。
4、常见问题解答
Q1: 磁珠是否需要提前包被？
否：磁珠已偶联CD3/CD28抗体，直接使用即可。
Q2: 如何判断活化成功？
形态学：活化后T细胞体积增大，呈母细胞化。
标志物检测：CD25（IL-2Rα）、CD69表达上调（流式验证）。
Q3: 磁珠残留如何处理？
磁性分离：重复磁力架吸附2–3次可去除99%以上磁珠。
5、注意事项
•无菌操作：全程在超净台中进行，避免污染。
•避免冻融：磁珠保存于2–8°C，不可冷冻或离心。
•细胞活性监测：扩增期间每日用台盼蓝检测活率（应≥90%）。
•替代方案：如需符合GMP标准，推荐CTS™ Dynabeads™（货号A40203）。
6、预期结果
•扩增倍数：7–14天后T细胞数量可增加50–1000倍（取决于起始细胞类型）。
•表型分析：扩增后的T细胞以效应记忆表型（CD45RO⁺CD62L⁻）为主。
八、内容与储存
•Dynabeads™人T活化剂CD3/CD28以悬液的形式提供，由 4×10 7 Dynabeads™/mL的磁珠溶于磷酸盐缓冲盐水(PBS)组成，pH值 7.4，另含0.1%的人血清白蛋白 (HSA)。
•储存条件：2°C至8°C。切勿冷冻。