细工生物就器官培养的要求及特点就要点与关注重点-临床应用无障碍为目的

1：离体后首代培养基重点开发、可行性、稳定性、重复性高。细胞活性高（建系标准为目的，国产培养基备份替代体系）应用无BUG为最终目的。
2：在体外条件下,由于缺乏血液循环系统,器官培养物的养分及氧气的供应主要靠自然渗透
。要点是成球后，增值速度，细胞团质量。我们解决该问题优势是易成团成片类细胞系技术储备充足，不管那个厂家,通用，在后期增殖可行性明显，北京用户有富裕样本的，我们可做预实验比较。外地用户在讨论。外地能协作的实验室，建议细胞系方面先合作半年后可委托。

可讨论内容，给出详细资料，问题描述，目的需求，厂家不公开的不好判断，只能通过技术储备过的资料判断（生长特性要描述清楚），较被动。
1：器官培养的取材
2：培养基
3：培养环境中的气体
4：培养器官的支持物

以下参考，可讨论【注意事项】
器官培养的方法及应用
国内技术储备，可行性更高。
固体培养基器官培养法
小鼠肠上皮类器官的培养-
液体培养基器官培养法
毛囊的器官培养
肝芽类器官培养
动态器官培养法
全胚胎培养
大鼠组织工程肝脏的灌注培养
 组织工程肝脏内部肝细胞
体内器官培养法
人源肿瘤异种移植模型
三维细胞培养技术
肿瘤细胞球培养
基于生物材料/多孔支架培养
基于胶原凝胶体系培养胚胎干细胞 
大鼠鼠尾胶原溶液制备方法步骤
尾腱的结缔组织层
基于胶原-matrigel 基质胶体系培养乳腺上皮细胞 
邮件联系-内容较多，了解需求后，在沟通会精准些。
超量培养后，细胞膜纯化（蛋白纯化）高手请留步，应用国产产设备与技术老师更欢迎联系（相关可中试纯化对接项目，技术优势请介绍）。讨论相关重点。

配合免疫细胞压力测试
-类器官
转染前悬浮驯化贴壁-转染
机器人需悬浮生长驯化贴壁生长等

  

20230316 可通过促贴壁试剂驯化，把悬浮细胞特性细胞，驯化成贴壁生长，配合相关设备完成细胞拉伸工作，转染，共聚焦等需求实验，进行测设。  
其他需求可讨论，去掉该试剂，细胞恢复原特性。

20230318 三维立体后营养传输障碍是我司重点攻关目标，配合压力、机械力、化学组分（营养渗透）以化学试剂部分为主，对细胞系问题常年统计，各类培养中难点特点了解还算深入，以保种建系为自律标准，各类难养可参考我们其他相关介绍。并结合培养基开发，推荐方案考虑方案完备性，可行性较高，都建议在细胞系前期验证后，在应用目的细胞，优点是，细胞系验证通过，培养体系固定，只考虑其他POTOCOL比较可行稳妥。参考建议对照GIBCO，LONZA是我们常年统计后推荐比较厂家。特殊难养细节部分都可讨论。我司在离体步骤，首代培养基推荐，及后期增值，做较详细内容统计。
目前也考虑代理细胞压力，拉力相关设备厂家产品，拿到更多相关培养中问题，发挥我司细胞培养方面的优势。
我司类细胞培养主要思路，单克隆后，增殖相关提速训化培养（保种体系优势明显），超量2D培养后，在做成球相关，优势是细胞质量统一，后期维持培养球质量高，如能解决传输障碍配合，极限球后增殖应该有明显优势。
相关关键词：钙，细胞膜提取及营养递送，原代稳转珠建系（转染试剂部分统计，难转细胞统计），超量培养相关，含血清方案为主，细胞工厂2D为主。超量细胞2D规模转染，蛋白纯化技术储备。
重点地区我们配合实验室完成：武汉，武大为主，杭州，西北工业大学，北京。

 

20230912:细工经统计与自身对细胞系技术储备结合，明确我司类细胞（类器官）先建系，明确细胞身份后，建系后再成球或其他相关实验，对药物评价方面研究也可先二维常规培养验证预期（优势各实验室都很熟悉，相对容易很多）有明显预期结果后，在做成球方面深入研究。肿瘤与正常细胞可同时进行。

就上述方向细工优势：建系用慢病毒腺病毒相关蛋白高产几年来是我们重点开发的方向，企业工业用户相关应用也很满意。

相关可讨论：种子来源（评价及推荐，各厂家优略参考意见），试剂保种体系国产备份，技术细节统计及储备。耗材推荐参考。细节处反复强调，最终目的是建系成功。可重复性高。

离体后处理问题讨论（各组织来源不同，我们结合难养系常见问题参考补充）。

培养体系优化，建系需大量试剂，对成本要求高，协和细胞库培养经验与可行性我们认可并学习。经难养系多厂家反复互换培养，得出参考意见是，用更高体系完全兼容普通培养体系（一定要大厂家，成分可查，厂家研发提供较详细资料，我司总结的正常肝细胞系非常有参考案例（thle-3对ATCC官网公开部分常年统计，对现状类器官培养基我司片面意见是，成分太多了，简单阐述是，原代，腺，神经类各种营养因子都有，培养后目的细胞不明确，肿瘤，正常，巨噬等，后面用途可能会更模糊（个人意见，说的不对处，老师谅解并提携指正）

干细胞球消化对不加载体类细胞直接成球很有参考意义，干细胞相关研究国内有很多大牛实验室一直在做。经验很丰富。

微载体方法建议用下我们促贴壁试剂比较，球传球，优势明显。

关于直接成球方法，我司正准备上胚胎培养基试试，球增殖较难，居于文献面太窄了，有上相关实验后的细节问题都可讨论。胚胎培养大牛实验室要路过，给发个信息，后面有问题需咨询。

合作实验室已经应用好几年了，这两年类器官公司相关出来很多，有点懵，静下心来，明确我司方向，建系后成球相关为主。长久方向。欢迎技术参与留言。

20250530

两种以上共培养细工通用培养基应用参考

注：类器官应用，含血清方案，先二维，足量细胞后在用成球配套球培养方法，培养中痛点先行预实验验证。
1：胎牛血清用量5-15%根据因子配套使用量加减，
2：组织离体处理步骤繁琐的（化学成分影响）可考虑我司推荐无外力（化学力，机械力）影响直接剪碎后培养，生长顺利后，在用简易单克隆出目的细胞，建系前几代培养会顺利很多。需要详细potocol来信告知。
3：黑点，生长慢组建议用备份组，也建议遇到同类问题先行验证生长顺利可行性，慢病毒建系我司提供高质量预实验方案（十倍百倍滴度可行性验证可以预实验为主）
4：冻存复苏：推荐传统DMSO+40-90%胎牛组，程序降温优化（理论每分钟降0.4-0.6）原代与免疫细胞验证预实验先行。
5：神经类，腺类，上皮类包含多种特点并存的，根据生长特点具体问题具体分析，例如：免疫类细胞系分化后继续共培养，细胞状态要求极高（不只是当前两三天培养）我们目的是超长时间共培养，含血清方案优势会非常明显（预实验能说明），通过培养种问题解决预验证极为重要，修复部分需要试剂高质量，技术特点熟悉，问题充分理解，并解决问题。
6：可建系目的用户，合作方式灵活，我司提供案例细胞293，问题验证的标明，配套试剂组合免费试用，院校组最少三家实验室共同申请免费试用，各类难养系需国内正规库来源，问题详细描述，需要救助理想状态。
注：以下细胞可讨论完全培养基细工方案，建议备份预实验验证，黑点，生长慢，无文献支撑，预算成本限制等纯国内备份体系。细工优势免疫细胞系分化后维持培养，种子库试剂明显优势，长期课题组建议免疫细胞系保种开始讨论沟通，正常增殖传代，试剂，耗材，技术储备，团聚解决，转染（多厂家汇总参考原理讨论）冻存复苏（活率长期方法验证10-90%活率对建系目的重要性）
神经干细胞---皮质神经元--多巴胺能神经元--运动神经元--星形细胞--（神经）胶质细胞--心肌细胞--骨骼肌--血管内皮/平滑肌--肝细胞--胰岛 β 细胞-肺--jurkat,HL-60,THP-1,SU-DHL-4,SU-DHL-6-HUVEC--成纤维细胞 3T3 

20250610

7：适合无文献支撑备份参考（建议新手验证容错率更高，自动化培养过程同类问题验证同理），细胞生长慢，黑点验证是否污染，含血清后细胞缓冲能力强，大部分问题验证救助及恢复级别试剂配合课题备份补充，难养系验证备份说明培养体系可行性，需长时间验证反复冻存复苏（修复体系需要更多组细胞反复验证，救助案例）。
8：建系目的用户，可参考我司解决污染思路，单克隆推荐方法，培养驯化，增殖驯化。

案例参考补充：
细工通用培养基应用参考   -多细胞共培养参考                                             
神经干细胞    通用培养基、谷氨酰胺、Neurobasal培养基、N2、B27、SB431542、CHIR99021、化合物E、人LIF、Noggin、bFGF、EGF                                            
皮质神经元    通用培养基、谷氨酰胺、Neurobasal培养基、N2、B27、SB431542、CHIR99021、化合物E、Noggin、bFGF、EGF                                            
多巴胺能神经元    通用培养基、谷氨酰胺、Neurobasal培养基、N2、B27、SB431542、CHIR99021、化合物E、人LIF、SHH、FGF8、BDNF、GDNF、TGFβ3、cAMP                                            
运动神经元    通用培养基、谷氨酰胺、Neurobasal培养基、全反式视黄酸（ATRA）、SHH、BDNF、CNTF、GDNF                                            
星形细胞    通用培养基、谷氨酰胺、非必需氨基酸、青霉素-链霉素、FBS、bFGF、CNTF、BMP4、激活素A、Heregulin 1β、IGF-1                                            
少突（神经）胶质细胞    通用培养基、谷氨酰胺、Neurobasal培养基、N2、B27、SB431542、CHIR99021、化合物E、人LIF、全反式视黄酸（ATRA）、SHH、SAG、PDGF、IGF-I、NT3、胰岛素、T3、cAMP                    
心肌细胞    通用培养基、B27、rH-白蛋白、L-抗坏血酸2-磷酸、乳酸、CHIR99021、Wnt-C59                                            
骨骼肌    通用培养基、FBS、谷氨酰胺、青霉素-链霉素、非必需氨基酸、2-qjyc、油酸、亚油酸、硫酸铁、葡萄糖酸铁钠、马血清、Y-27632、bFGF                                            
血管内皮/平滑肌    通用培养基、谷氨酰胺、Neurobasal培养基、N2、B27、CHIR99021、BIO、Y-27632、BMP4、VEGF、Forskolin、PDGF-BB、激活素A、肝素                                            
肝细胞    RPMI 1640、B27、激活素A、BMP4、bFGF、HGF、Oncostatin M                                            
胰岛 β 细胞    通用培养基、IMDM、牛血清白蛋白、N2、B27、ITS、BMP4、激活素A、FGF7、Noggin、bFGF、EGF、烟酰胺、Exendin-4、全反式视黄酸（ATRA）                                            
肺    通用培养基、谷氨酰胺、B27、N2、抗坏血酸、硫代甘油、胎牛血清、青霉素-链霉素、Y-27632、Dorsomorphin、SB431542、IWP2、CHIR99021、BMP4、bFGF、激活素A、FGF-10、FGF7、EGF、全反式视黄酸（ATRA）              

jurkat,HL-60,THP-1,SU-DHL-4,SU-DHL-6 通用培养基、胎牛血清、国内细胞库来源
HUVEC 通用培养基、胎牛血清、国内细胞库来源
成纤维细胞 3T3 通用培养基、胎牛血清、国内细胞库来源