
当今医学实验诊断领域,针对特定基因、抗原和抗体的检测试剂盒已非常普遍,但是却很少有厂家生产针对病原体抗原、肿瘤抗原或自身抗原等特异性T细胞的检测试剂盒,因为抗原特异性T细胞(Antigen-specific T cell, AST)的检测技术要比抗原、抗体和基因的检测困难很多,同时涉及三方面的限制因素:病原体抗原、肿瘤抗原或自身抗原的多样性和高度特异性;人类主要组织相容性抗原(HLA)的高度个体差异性;细胞操作和功能活性。但众所周知,AST是介导适应性免疫应答的核心细胞,在抗病毒感染、抗胞内菌感染、抗肿瘤、超敏反应、移植排斥以及自身免疫病中,抗原特异性的效应性T细胞和抗体是最主要的两种效应物质或致病物质,T细胞甚至比抗体更加重要。AST的数量和反应活性检测在监测疾病进程、指导治疗方案、评价临床疗效、预测疾病慢性转归以及疫苗效果评估等方面都有着不同于抗体的重要参考价值。但是,由于没有简便易行的T细胞检测技术和试剂盒,我国科研和临床界至今对患者AST数量或功能的检测仍然非常困难,因此关于特异性细胞免疫在各类疾病发展中的临床意义也极少报道,这在一定程度上限制了我国临床免疫学和精准医疗的更快发展。
T 细胞膜上的TCR与抗原提呈细胞膜上pMHC分子(peptide/MHC复合体)的特异性结合是T细胞抗原特异性的物质基础。目前已见商业产品的AST检测技术只有胞内细胞因子荧光染色法流式分析法、ELISPOT和pMHC多聚体荧光染色流式分析等三种方法,但试剂种类极少,不适于临床应用,只在科研中有一些零星报道。
本公司专注于抗原特异性T细胞检测技术及相关试剂盒的研发,致力于研制各种病毒感染性疾病、肿瘤以及自身免疫病的抗原特异性T细胞检测试剂盒及配套试剂,特别注重所研发试剂盒的系列性和全面性,即既能覆盖绝大多数HLA等位基因的患者,以适应临床检测需要,又能覆盖绝大多数的抗原种类和T细胞表位,以最大程度地展现患者的特异性细胞免疫功能状态,为精准医疗和临床免疫学研究提供基于患者HLA等位基因个体差异性的和病原性抗原特异性的细胞免疫学检测工具。
目前已成功研发的主要产品包括:乙型肝炎病毒特异性T细胞个性化检测试剂盒(ELISPOT法)以及HLA-A、B、C等位基因分型试剂盒。本公司每类产品的特色简介如下:
1、HBV特异性T细胞个性化检测试剂盒(第二代,ELISPOT法):
本试剂盒利用本公司筛选所得的201种来自HBV五种抗原的真实抗原肽组成广谱CD8+T细胞表位肽库,其中103种抗原肽被13种优势HLA-A分子提呈,83种被15种优势HLA-B分子提呈、54种被14种优势HLA-C分子提呈,且每种抗原肽能被 3-5 种 HLA 分子交叉提呈。这些优势HLA-A、B和C分子的基因总频率分别覆盖95%,71%和93%左右的中国人群。因此,本HBV抗原肽库符合中国最广泛人群的HLA-ACBC基因多态性,具有中国人群普适性,并且具有丰富的HBV表位代表性,能检测至少240种CD8+T细胞克隆。根据HBV抗原种类的不同将上述201种抗原肽分成11个肽库,组装成肽库阵列的ELISPOT试剂盒,定量检测乙肝患者外周血中处于记忆或活化状态、并且具有免疫反应活性的HBV特异性CD8+T细胞数量,为监测疾病进展和判断预后转归、评价抗病毒治疗和免疫治疗的效果,指导治疗方案、预测停药后复发的风险以及预测HBV相关肝癌的转归和复发风险等提供精准的细胞免疫学指标。
2、肝癌抗原AFP特异性T细胞定量检测试剂盒(ELISPOT法):
本试剂盒利用本公司筛选验证的68种AFP抗原的真实抗原肽组成广谱CD8+T细胞表位肽库,其中33种抗原肽被13种优势HLA-A分子提呈,33种被15种优势HLA-B分子提呈、21种被14种优势HLA-C分子提呈,且每种抗原肽能被 2-4 种 HLA 分子交叉提呈。这些优势HLA-A、B和C分子的基因总频率分别覆盖95%,71%和93%左右的中国人群。因此,本AFP抗原肽库符合中国最广泛人群的HLA-ACBC基因多态性,具有中国人群普适性,并且具有丰富的AFP表位代表性,能检测至少87种AFP特异性CD8+T细胞克隆。将上述68种抗原肽分成3个肽库,组装成肽库阵列的ELISPOT试剂盒,定量检测肝癌患者外周血中处于记忆或活化状态、并且具有免疫反应活性的AFP特异性CD8+T细胞数量,为评价临床疗效、指导治疗方案和判断预后等提供精准的细胞免疫学指标。
3、HLA-A、B、C基因分型试剂盒:
本试剂盒采用了世界卫生组织国际组织相容性工作组(IHWG)推荐的HLA基因分型标准方法:PCR-SBT(PCR-Sequencing-Based Typing),利用IHWG推荐的标准PCR扩增引物,分别对HLA-A、B、C三个I类基因位点进行高分辨率的等位基因分型。本试剂盒包括了从血细胞DNA提取到HLA基因位点特异性PCR扩增的所有试剂,用户将PCR产物快递给本公司,由本公司进行后续的基因测序、数据库序列比对和HLA等位基因判定等。所有费用都包括在试剂盒的销售价格中,而且费用远低于市场同类产品和技术服务。