本试剂盒是利用荧光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的 A-T富集区域，支原体的DNA中 A-T含量高（55％～80％），可将其染色而被检测到。被支原体污染的细胞经染色后在细胞周围可看到许多大小均一的荧光亮点，即为支原体的 DNA 染色斑。Hoechst 33258 和双链 DNA 结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。