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产品简介
EnzyValley EVNext® Universal SYBR qPCR Mix是一款基于 SYBR染料、用于 qPCR 和 两步法 RT-qPCR的高性能预混液。
该预混液包含一种经分子改造的热启动DNA聚合酶和定向优化的PCR 缓冲液，在60℃下能够严格封闭DNA聚合酶活性，非常适合定量检测基因组、质粒、病毒和 cDNA 模板，具有高度的可重复性、灵敏度和特异性。
该预混液含有特殊的 ROX 被动参比染料（Passive Reference Dye），适用于各种qPCR仪器，无需在不同仪器上调整ROX的浓度。
此外，该产品还有dUTP/UDG防污染系统版预混液（EVNext® Universal SYBR qPCR Mix U+）可供选择，更好地解决气溶胶污染问题，保证结果的准确性。
产品特点
01扩增特异性高
热启动形式的DNA聚合酶可有效避免产生引物二聚体和非特异性扩增。
02宽线性范围
准确定量靶标浓度横跨8个数量级的样本。
03数据稳定性高
反应体系配制后室温放置48 h仍具有优异的扩增性能，即使在较长操作时间下也可获得稳定的测试结果。
04荧光信号高
扩增曲线、熔解曲线线型更好，信噪比更高。
05兼容复杂模板
对一定降解程度的样本以及高GC含量、结构复杂的靶标可以实现稳定扩增，得到理想结果。
06广泛的平台适用性
预混通用参比染料，无需额外添加用于校正孔间荧光信号的参比染料。
07程序兼容性强
兼容各种qPCR仪器，可根据仪器型号选择标准程序或快速程序定量。
应 用
基因表达差异分析
绝对定量分析
siRNA验证
病原体检测
基因分型
支持数据
01
复杂样品的扩增效率和特异性
使用EVNext® Universal SYBR qPCR Mix开展复杂样本的qPCR定量分析，获得了更高的扩增效率和特异性。
图1 . EVNext® Universal SYBR qPCR Mix扩增复杂样本效果更好
使用不同品牌的染料法qPCR预混液，从小鼠粪便基因组DNA中分别扩增4种肠道微生物AKK、BAC、CLO、LAC对应的靶标基因。
02
低丰度基因检出
使用EVNext® Universal SYBR qPCR Mix 定量检测多个低丰度表达基因（Ct 值30-35）时，扩增效率更高且目标产物峰单一。
图2 . EVNext® Universal SYBR qPCR Mix 扩增低丰度基因效率高，且不产生引物二聚体
使用不同品牌的染料法qPCR预混液，分别扩增293T细胞cDNA的4个低丰度表达基因。
03
扩增高GC含量基因的特异性
EVNext® Universal SYBR qPCR Mix 扩增高GC含量基因时，扩增曲线线型优美，且熔解曲线峰单一，具有优良的特异性。
图3 . EVNext® Universal SYBR qPCR Mix 扩增高GC含量基因特异性更好
使用不同品牌的染料法qPCR预混液，分别扩增GC含量为70%、75%、80%的三个靶标基因。
04
定量的线性范围
使用EVNext® Universal SYBR qPCR Mix 在宽广的线性范围内得到的扩增效率符合MIQE (Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments) 指南要求范围（90-110%），扩增曲线平台期荧光值稳定，产物特异性高。
图4 . EVNext® Universal SYBR qPCR Mix 进行绝对定量分析时定量范围宽广且准确度高
将U6质粒标准品（108 copies/μL）进行连续 7个10倍梯度的稀释，使用EVNext® Universal SYBR qPCR Mix扩增U6基因。
05
防污染能力
EVNext® Universal SYBR qPCR Mix U+可在室温下高效清除体系中存在的气溶胶污染物，有效保证检测结果的准确度。
图5 . EVNext® Universal SYBR qPCR Mix U+具有高效的防污染能力
使用EVNext® Universal SYBR qPCR Mix U+分别扩增10000个拷贝的dUTP替代dTTP的DNA模板和正常的DNA模板。
06
耐受不同来源PCR抑制剂的性能
深度优化的PCR缓冲液配方，使得EVNext® Universal SYBR qPCR Mix 对来自植物（如木聚糖）、土壤（如腐殖酸）和粪便（如胆酸盐）的抑制剂表现出较强的耐受性。
图6 . EVNext® Universal SYBR qPCR Mix 的扩增性能不易受各类抑制剂的影响
以 HeLa 细胞 cDNA 为模板扩增U6基因。反应体系中包含：1-无抑制剂；2-腐殖酸（0.5 μg/mL）；3-胆酸盐（10 mM）；4-木聚糖（250 μg/mL）。
07
结果重复性
EVNext® Universal SYBR qPCR Mix具有严谨的热启动酶活封闭效果，使得扩增结果非常稳定，即使将配制好的反应体系室温放置48 h后Ct 值波动仍然很小，且平台期荧光值稳定。
图7. EVNext® Universal SYBR qPCR Mix 的多复孔检测结果高度一致，且反应液在室温长时间放置后依然稳定
以 HeLa 细胞 cDNA 为模板，检测GAPDH基因的表达，在配制96管反应液后，分别进行两组处理：1-配制后立即取48管上机；2-配制后室温放置48 h后取剩余48管上机。
08
储存稳定性
EVNext® Universal SYBR qPCR Mix的酶活稳定性高，经不同条件储存或处理后扩增结果基本不受影响，扩增性能与-20℃存放的对照组相比无明显差别。
图8 . EVNext® Universal SYBR qPCR Mix 在不同温度下储存或反复冻融处理后酶活稳定性高
以-20℃储存预混液为对照，使用4℃存放1个月、37℃放置7天或反复冻融20次的 EVNext® Universal SYBR qPCR Mix ， 扩增HeLa 细胞 cDNA 样本中的HPRT基因。