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成功率更高，速率更快，设置更简单，值得信赖的PCR酶
EVNext®高保真DNA 聚合酶是通过分子动力学模拟、AlphaFold2结构预测、结构域融合等理性设计手段筛选而得到的高性能PCR酶。
EVNext®高保真DNA 聚合酶针对dUTP 结合口袋进行专有突变，克服了高保真酶不能兼容dUTP的重要限制，使其能够掺入 dUTP 并能扩增含尿嘧啶的DNA 模板。同时，该酶还保持着高保真DNA 聚合酶的所有优越特性：高准确性、高速度、强延伸能力、高特异性扩增复杂基因组模板以及高效率扩增含抑制剂的DNA模板。
产品优势
l 保真性高—约200×Taq保真度，各种GC含量的DNA片段均能保持较低的扩增错配率。
l 快速简便—延伸速率最快可达5 sec/kb，提供使用方便的预混液剂型，允许PCR产物直接凝胶上样。
l 成功率广—高效扩增高GC含量片段、包含抑制剂的DNA模板以及长达20kb的长片段基因，还可以直扩大肠杆菌菌液或全血。
l 耐受尿嘧啶—可掺入 dUTP 并扩增含尿嘧啶的DNA模板。
l 稳定性好—37℃存放一周或反复冻融20次后产品性能保持不变。
应用
l 基因克隆、点突变
l NGS文库扩增
l 亚硫酸氢盐转化 DNA 的扩增
l 残留污染控制
l 基于尿嘧啶切除 (USER) 的克隆方法
EVNext® 高保真 DNA聚合酶的支持数据
1、PCR产物序列的准确性测试
作为具有校正功能的超高保真度的聚合酶，使用EVNext® 高保真 DNA聚合酶产生的扩增子错误率非常低，让您对PCR产物序列准确性充满信心。
图1 不同品牌高保真酶相对于Taq DNA聚合酶的保真度。通过二代测序分子标签法确定错误率，随后均一化为相对于Taq DNA聚合酶的保真度倍数。
2、反应程序设置
由于其反应体系的高特异性，使用EVNext® 高保真 DNA聚合酶无需优化退火温度，当引物熔解温度Tm在50℃-65℃范围内时，所有的靶标都可以使用60℃的通用退火温度来进行扩增。
图2 在两种退火温度条件下进行PCR扩增
从50ng人类基因组DNA（gDNA）中扩增10个不同Tm（如图上方标示）的靶标。采用60°C通用退火温度（左图）或使用Tm计算器计算的退火温度（右图）。
不同长度的靶标均使用同一退火温度（60℃）和基于最长扩增子的延伸时间，即在同一模块中同时扩增多个靶标，不会影响PCR产量和特异性。
图3 EVNext®高保真DNA 聚合酶可同时扩增多个PCR靶标
从人类基因组DNA中扩增5个不同长度的靶标，对所有靶标采用基于最长扩增子的延伸时间（最长10.0kb ，需150秒）的通用循环方案（左图），或针对不同靶标采用不同的延伸时间方案（0.6kb 5秒，1.0 kb 15秒，2 kb 30秒，5.0 kb 75秒，10.0 kb 150秒）进行扩增（右图）。
3、PCR扩增的产量和特异性
使用EVNext® 高保真 DNA聚合酶可获得更高的PCR特异性和产量。采用独特的反应Buffer体系，在配制PCR体系时有效抑制酶的活性，防止非特异性扩增和引物降解。
图4 使用EVNext®高保真DNA 聚合酶扩增产量高、特异性强
使用不同品牌的DNA聚合酶，按照厂家推荐方案从100 ng人类gDNA中扩增 0.5-5.0 kb DNA靶标。
4、靶标扩增的灵敏度
较高的PCR扩增效率，可以在低至0.08 ng的人基因组DNA中实现靶标基因的扩增。
图5 EVNext®高保真DNA 聚合酶扩增灵敏度高
使用不同品牌的DNA聚合酶， 按照厂商推荐的方案从不同含量的人类基因组DNA中扩增1.0kb的靶标。
5、PCR抑制剂耐受力
采用先进的融合蛋白改造技术和独特的PCR增强剂配方，EVNext®高保真DNA 聚合酶对来自植物（如木聚糖）、土壤（如腐殖酸）和血液（如血红素）的抑制剂表现出较强的耐受性。
图6 EVNext®高保真DNA 聚合酶的耐抑制剂性能强
使用不同的DNA聚合酶，按照厂商推荐方案从50 ng 人gDNA中扩增1.0kb靶标。反应组分中包含：1-无抑制剂；2-腐殖酸（0.5 μg/mL）；3-血红素（2.5 μM）；4-木聚糖（250 μg/mL）。
6、扩增高GC含量靶标
反应buffer中配有 GC 增强剂，可更高效地扩增GC含量>65%的序列。
图7 使用EVNext®高保真DNA 聚合酶高效扩增高GC含量模板
使用不同的DNA聚合酶，按照厂商推荐方案从50 ng 人类gDNA中扩增4个高GC含量（如图上方所示）的1.0kb靶标。
7、长片段扩增能力
持续合成能力强，可扩增长片段DNA—10kb的人类gDNA片段和15 kb的Lambda DNA片段。 延伸速度为15sec/kb, 扩增时间大大缩短。
图 8 EVNext®高保真DNA 聚合酶的长片段扩增能力
使用EVNext®高保真DNA 聚合酶成功扩增2个不同长度的长片段靶标：10 kb的人类基因组DNA靶标（左图）和15kb的Lambda DNA靶标（右图）。
8、耐受尿嘧啶能力
以重亚硫酸盐处理后的人类基因组DNA为模板，使用EVNext®高保真DNA 聚合酶成功扩增多个不同长度靶标，扩增效率不受尿嘧啶影响。
图 9 EVNext®高保真DNA 聚合酶耐尿嘧啶扩增测试
9、保存稳定性
配制好的PCR反应预混液在4℃存放2个月，或在37℃放置7天，或反复冻融20次，其扩增性能与-20℃存放的对照组相比无明显差别。
图10 EVNext®高保真DNA 聚合酶的稳定性测试
使用不同条件保存或处理的EVNext®高保真DNA 聚合酶，从50ng 人类基因组DNA中扩增0.5kb、1.0kb靶标。