粘性末端快速连接预混液

产品概述 Rapid Sticky-end Ligase ProMix是一种即用型的2× 预混液，包含高浓度的T4 DNA连接酶和为粘性末端快速连接优化的缓冲液，大大提高了粘性末端的连接效率和转化效率，确保克隆实验的成功率；25℃孵育5 min即可进行转化，大幅度减少了克隆实验所需要的时间；此外，连接产物可转化多种大肠杆菌感受态细胞。
产品内容

组分	K031A	K031B
Rapid Sticky-end Ligase ProMix	250 μL	500 μL

 

产品优势
快速：5 min即可完成连接反应
高连接效率：低浓度的DNA底物也可以完成连接反应并转化成功
方便快捷：2×预混液包装，减少加样次数，使得克隆更为高效

实验案例
1.   粘性末端 5 min快速连接           以EcoRΙ、SalΙ进行双酶切后回收得到的pET-28a载体及基因片段（500 bp）作为粘性末端连接底物，用Rapid Sticky-end Ligase ProMix进行25℃，5 min快速连接后，转化到DH5α感受态细胞，培养12-16 h后，平板菌落生长状况如图1所示，随机挑取15颗单克隆用载体通用引物进行菌落PCR，后进行琼脂糖凝胶检测，如图2所示，分析上述结果可得，Rapid Sticky-end Ligase ProMix对粘性末端的连接具有优异连接效率及阳性率。
2.  高连接效率
  以HindⅢ、EcoRΙ进行双酶切后回收得到的pUC19载体及基因片段（0.5 kb）作为粘性末端连接底物，用从A、B公司购入的同类产品、T4 Quick Ligation Mix、Rapid Sticky-end Ligase ProMix进行25℃，5 min快速连接，后转化到DH5α感受态细胞，在含有X-Gal、IPTG、Amp的L-琼脂平板上培养，形成单菌落，并进行菌落计数并计算转化效率。从结果中可看出英赞的T4 Quick Ligation Mix、Rapid Sticky-end Ligase ProMix具有较高的转化效率及连接效率。
应用范围 粘性末端连接、dsDNA切刻修复、高丰度文库制备