产品介绍

    慢病毒经浓缩后，可以高效地将基因稳定地整合到宿主基因组中，特别适合用于难以通过常规方法转染的细胞，如神经细胞、干细胞和免疫细胞如原代T细胞等。IPHASE 慢病毒包装试剂盒提供了慢病毒包装所需用到的所有试剂，包含了慢病毒包装质粒混合物Lentivirus Packaging Plasmid Mix、转染试剂Transfect Reagent、对照质粒eGFP Plasmid （AMP+）和慢病毒浓缩液Lentivirus Titer-enhanced Solution，省去了试验前准备的繁琐过程，可直接使用，通过使用配套的浓缩液可以有效提高病毒滴度，提高慢病毒转染便利性。试剂盒中各组成成分经过严格的质量检测，实验结果准确、可靠、重现性好。

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产品详情

中文名称：慢病毒包装试剂盒

英文名称：Lentivirus Packaging Kit

规格：10 Test

保质期：1年

保存条件：A盒——-15~-25℃，B盒——2~8℃

产品关键词：慢病毒、慢病毒包装、慢病毒浓缩液、细胞转染

产品组分：

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使用方法

    提前制备转染所需的293T细胞，使用Transfect Reagent把包装质粒、包膜质粒和目标DNA eGFP 质粒共转染进293T细胞，细胞转染6h后把培养基更换为完全培养基，培养48h-72h，收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，并使用lentivirus titer-enhanced solution对收集的上清液浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液，可在293T细胞或者慢病毒滴度试剂盒中测定病毒滴度。在一定滴度范围内的慢病毒颗粒可以满足大部分体内体外实验需求。

1 细胞准备

1）将处于对数增长期的293T细胞按照6million/皿的两传代到100mm培养皿中，置于5%的二氧化碳培养箱中培养，当细胞融合率达到80%左右时准备转染。

2）转染前1~2 h按照12mL/皿的量为需要转染的细胞更换新鲜的DMEM基础培养基。

注：293T细胞贴壁性不好，更换培养基时应尽量避免冲起293T细胞。

2   转染

1）  请于冰浴条件下解冻Lenti Packaging Plasmid Mix和eGFP Plasmid，并混合均匀。

注：Lenti Packaging Plasmid Mix和eGFP Plasmid需在-20℃冷冻保存，切勿反复冻融，若一次用不完，可于第一次化冻后按照需求量分装并冻存。

2）准备两个1.5ml无菌离心管，分别标记为管A和管B，按照以下表格进行体系配制：

3）混合均匀，并于室温条件下平衡5min，备用。

4）将管A和管B的溶液合并，混合均匀后于室温放置 18~20min 。

5）将混合液均匀滴加到预处理好的293T细胞培养皿中，放置在 CO₂培养箱中培养。

6）转染6h~8h后，小心吸掉细胞培养液弃于盛有消毒液的废液杯中，然后加15mL完全培养基继续培养。

注：此时培养基与所用的移液枪头等都已含有少量的病毒，必须经消毒液浸泡处理后才能丢弃。

3 收集与浓缩

1）换液48h~72h后，转移细胞上清液至50mL离心管，4℃，500g离心5min。

2）  收集离心后上清液，使用0.45μm滤器过滤后至新的离心管中。

3）按1：3比例加入Lentivirus Titer-enhanced Solution进离心后的上清液，2℃~8℃冰箱放置过夜。

4）4℃，1500g 离心 60min，弃上清。

5）加入原1/10或1/100的DMEM基础培养基，建议使用转染目标细胞培养基重悬，于-60℃~-90℃冰箱保存。

订购信息

汇智和源从汇智泰康独立而来，“IPHASE”为核心产品品牌，公司致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的试剂产品，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。