2×Pfu PCR MasterMix(含染料)
产品特点
本产品包含 Pfu DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为 2 ×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度的减少人为误差。适用于高保真 PCR、复杂模板如GC 含量高(>60%),有二级结构的扩增和大规模基因检测。
它具有下列特点:
1. 显著提高 PCR 的特异性和灵敏度;
2. 多次冻融或长期放于 4℃不会影响活性;
3. 快速简便,大大降低劳动强度和取样误差,而且加入了高性能的PCR增强剂和优化剂,降低了对 PCR 条件的要求;
4. 分含染料和不含染料两种体系。含染料的 MasterMix 产品在PCR结束后可以直接电泳,无需加入上样缓冲液。
成分规格
目录号 | 产品名称 | 规格 |
JK_C63634 | 2×Pfu PCR MasterMix(含染料) | 1ml/5×1ml |
JK_C63635 | 2×Pfu PCR MasterMix(不含染料) | 1ml/5×1ml |
-20℃可长期保存,多次冻融不会影响活性。如需经常使用,可存放于 4℃。 | ||
本产品仅供科研使用 ,不得用于其它用途 |
使用方法
(注 意:以下举例为常规PCR体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化)
1. PCR体系
试剂 | 用量 |
模板DNA | <1ug |
Primer1(10μM) | 0.5μl |
Primer2(10μM) | 0.5μl |
2×Pfu PCR MasterMix | 10μl |
ddH2O | Up to 20μl |
推荐反应体系(20μl)
(注 意:引物浓度请以终浓度 0.1 - 1.0 uM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系)
2. PCR程序
过程 | 温度 | 时间 | |
预变性 | 94℃ | 2min | |
25-35cycles | 变性 | 94℃ | 30sec |
退火 | 55-65℃ | 30sec | |
延伸 | 72℃ | 60sec/kb | |
最后延伸 | 72℃ | 5min |
注 意:
A. 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
B. 延伸时间应根据所扩增片段大小设定,Pfu DNA Polymerase 的扩增效率为1 kb/min。
C. 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数)
3. 结果检测
反应结束后取5μl反应产物,加入适量上样缓冲液(含染料的不用加),然后进行琼脂糖凝胶电泳检测。