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T7 RNA聚合酶是一种源自T7噬菌体的DNA依赖性RNA聚合酶，是体外转录(IVT)的行业标准酶。它可以有效地结合标准或修饰的三磷酸核糖核苷酸(NTPs)，快速合成大量mRNA，使其成为体外合成标记或未标记RNA的理想酶，用于科研、诊断或临床应用。
迈迪安新品无甘油T7 RNA聚合酶
无甘油T7 RNA聚合酶(HC)是一种高浓度(1,000 U/μL)DNA依赖的RNA聚合酶。该酶高度特异识别T7噬菌体双链的启动子序列，从5′→3′合成与启动子下游的单链DNA或双链DNA模板链互补的RNA。
T7 RNA聚合酶在无甘油存在的情况下提供卓越的性能，可用于开发可靠的体外转录检测。此外，它额外具有可兼容冻干的特性，冻干后可以用于常温储存，或用于微型检测体系。
01 产品应用
• RNA合成 (包括mRNA和sgRNA)
• 依赖核酸序列的等温扩增(NASBA)
• 合成用于杂交的RNA探针或用于体外RNA翻译的RNA模板
• 合成放射性标记/荧光标记RNA探针
• 生产反义RNA
02 性能数据
更高的转录RNA产量
将无甘油T7 RNA 聚合酶 (HC) (MDX201) 和Lyo-ReadyTM可冻干转录缓冲液一起冻干进行反应，同时与新鲜配置的MDX201，NEB T7 RNA聚合酶和ThermoFisher T7 RNA聚合酶进行对比验证。反应在37℃下孵育24小时，反应产物通过RNA提纯试剂盒（提取柱法）纯化。纯化后的RNA在1.5%琼脂糖凝胶上检测，使用溴化乙啶染色，紫外荧光观察。检测结果显示与同类T7 RNA聚合酶相比，使用MDX201合成的RNA产量要高得多。
使用0.1 ng的双链DNA模板编码的1 kb或4.5 kb的RNA进行体外转录反应。分别使用冻干的无甘油T7 RNA聚合酶(HC) (MDX201，红色)、NEB T7 RNA聚合酶(橙色)和ThermoFisher T7 RNA聚合酶(黑色)在37℃下孵育8小时，比较它们转录的RNA产量。其中在不同时间点的反应管被取出放到-20°C以停止反应，然后在最后一个反应时间点后统一通过RNA提取试剂盒（提取柱法）纯化后在 NanoDropTM 上检测RNA浓度。检测结果显示，在不同时间点使用MDX201进行转录得到的RNA产量都要远远高于对比试剂。
冻干后酶活性不受影响
将无甘油T7 RNA 聚合酶 (HC) (MDX201) 和 Lyo-ReadyTM可冻干转录缓冲液一起冻干后保存在37°C进行加速热稳定性检测，与新鲜配置的MDX201进行的转录反应进行对比。反应在37°C进行2小时，反应产物通过RNA提纯试剂盒（提取柱法）纯化。纯化后的RNA在1.5%琼脂糖凝胶上检测，使用溴化乙啶染色，紫外荧光观察。结果显示，无甘油T7 RNA聚合酶(HC)不受冻干影响，在复溶后依然保持相同的活性。
反应程序
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反应体系彻底混匀，大片段37℃孵育1-2h；短片段（<300nt）的转录本孵育4-6h。(注：孵育反应长达16h（过夜）或者使用多达2μg的模板将会有助于实现最大产量)。
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将NTP最终浓度增加1mM可提高RNA产量。
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DNA模板中EDTA含量应低于0.1mM。
常见问答QA ：为什么使用来自T7噬菌体的RNA聚合酶？
来自 T7 噬菌体的 RNA 聚合酶具有非常高的选择性和效率，可高频率的启动转录及有效的延伸，因此其引起的RNA 延伸速度比大肠杆菌RNA 聚合酶快约五倍。
QA： T7 RNA聚合酶启动子序列是什么？T7 启动子：5′ TAATACGACTCACTATAG 3′
T7 RNA 聚合酶在启动子序列中的最后一个 G 处开始转录，然后聚合酶使用相反的链作为模板从 5'->3' 进行转录，转录物中的第一个碱基将是 G。
不用，T7 RNA 聚合酶识别正义链的T7启动子序列，然后以反义链为模板，按照5'-3'的方向进行转录，转录生成的序列应当是与正义链完全一致的序列。
QA： 使用T7 RNA聚合酶合成时如何优化RNA产量？1）通过提高 rNTP 浓度和 Mg2+浓度（比总 NTP 浓度高至 4mM）或提高质粒DNA浓度（需要梯度测试来确定最合适的浓度）可以获得更高的RNA 产量。
2）可以添加无机焦磷酸酶至终浓度为 4 units/mL，来降低因焦磷酸盐积聚而结合并沉淀 Mg2+ 离子而引起的抑制作用。
3）RNase 在环境中普遍存在，是 RNA 生产过程中的一个重要风险因素。使用 RNase 抑制剂可阻断 RNase 的活性。我们建议在反应中使用RNase 抑制剂 (产品编号MDX056)。
RNase污染引起的RNA产物降解往往是主要原因。我们建议在反应中使用 RNase 抑制剂 (产品编号MDX056)。DNA 制备时也应不含 NaCl，因为NaCl对 T7 RNA 聚合酶有抑制作用（NaCl浓度不应超过 20 mM）。
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