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Circligase
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品牌 近岸蛋白(Novoprotein)货号M027-01B更新日期2025年08月04日
过期 长期有效
更新 2025-08-12 18:56
 
详细信息
           CircleLigase是一个热稳定性酶,可以催化具有5'-磷酸基团和3'-羟基基团的单链DNA(ssDNA)分子的环化,该反应不依赖于ATP。该酶可以在没有互补序列存在的情况下,高效催化200nt以内单链DNA分子的环化。
 


    产品特点:
        1) 标准反应条件下,不产生线性或环状的嵌合体结构;
        2) 环化连接酶可用于微量小片段单链DNA的连接,连接产物可通过滚环复制进行大量富集。
 
产品用途:
        1)产生环状的单链DNA分子,用于滚环复制或者滚环转录的实验研究;
       2)产生环状的单链DNA分子,用于RNA聚合酶和RNA聚合酶抑制剂的测定。

检测方法:
      1)连接产物经20% 丙烯酰胺/8 M 尿素的PAGE胶检测,线性DNA分子的迁移速度较环状DNA分子快。
     2)加入10U核酸外切酶I ( Exo I ),37℃反应45min,线性DNA被消化完全,而环状DNA分子不受外切酶的影响。

保存温度:-20 ℃保存,或- 80℃长期保存。

产品包装(A包装):
 
产品组成                              体积  
Circleligase (100U/μl)         10μl  
Circleligase Reaction Buffer            100μl  
50mM Mncl2 20μl  
Circleligase ssDNA Control Oligo (5 pmol/μl)                              5μl  
ddH2O                                    500μl  
 
质量控制:
所有组分经检测均无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶、磷酸酶以及RNA酶活性污染。
 
活性定义:
60℃条件下,1小时内催化1pmol线性5´-磷酸化的标准63-mer寡核苷转换成抵抗核酸外切酶I的环状结构所需要的酶量定义为1个活性单位。
 
常用反应体系(20μl):
产品组成                              体积  
Circleligase (100U/μl)         1μl  
5×Circleligase Reaction Buffer             4μl  
50mM Mncl2 1μl  
ssDNA                                 1-10pmol  
dd H2O                                   To 20μl  
注:1、Oligo ssDNA应含有5’磷酸基团和3’羟基基团;
2、若实验有特殊需要,可缩短反应时间至30min,若为复杂模板,反应时间应适量延长。
 
反应条件:
1×反应缓冲液条件下,60℃温育1h。
80℃,10分钟热失活。
 
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*Exonuclease I,能够从ssDNA 的3'-OH 末端分解生成 5'-单核苷酸,对ss DNA具有较高的特异性,不分解双链 DNA 及 RNA。