Language
产品简介
StarLighter 热启动 Taq Pro DNA 聚合酶经过性能优化，即能快速、高效合成大量 DNA 又能有效耐受各种抑制剂，可直接用于快速扩增、多重扩增及其他粗提样本的扩增。使用该酶可在室温配制反应体系，因为该酶使用抗体封闭，90℃ 以上 30 sec 才可恢复酶活性，所以在室温下没有活性，从而能有效避免形成引物二聚体和非特异性延伸，增加 DNA 扩增的特异性。该酶有 5’→3’ 外切酶活性，无 3’→5’ 校正外切酶活性。
本产品在扩增产物具有 3’-dA 突出末端，纯化后可直接用 TA 载体克隆。扩增速度 1 ~ 10 s/kb。
本产品为无甘油产品，可应用于冻干试剂的开发。
产品组分
储存及运输条件
-25 ~ -15℃ 保存，< 0℃ 运输。
产品应用
菌液直扩；
粗提样本扩增；
其他 PCR 快速扩增等。
产品特点
显著耐受各种抑制因子；
有效扩增 GC 含量高、二级结构复杂的模板；
省时高效：可用于菌液、菌落以及粗提取样本的直扩。
实验流程
- 体系配制（20 μL 反应体系为例）
- 使用试剂前确保彻底融化并混匀，加入反应体系的所有模板、引物等组分也应充分混匀；
- 计算所加各组分的体积（参考下面表格），并小心吸取准确体积到 PCR 反应管内；
组分 | 使用量 |
5 × Buffer (根据自己实验需求配制) | 4 μL |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 μL |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 μL |
StarLighter HotStart Taq Pro DNA Polymerase (Glycerine Free) | 0.2 ~ 1 μL |
dNTP (2.5 mM Each) 需自备 | 1.6 μL |
Template | 1 μL |
ddH2O | Up to 20 μL |
总体积 | 20 μL |
- 引物反应终浓度可以在1 ~ 1 μM 之间调整。
- 模板为基因组 DNA 推荐加入量 10 ~ 100 ng，模板为质粒或者PCR产物DNA推荐加入量 < 10 ng。
- 盖好管盖，瞬时离心。
- PCR反应程序推荐：
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 2 min | 1 Cycle |
变性 | 95℃ | 10 ~ 20 sec | 20 ~ 35 Cycles |
退火 | 55 ~ 65℃ | 20 ~ 30 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 ~ 60 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 3 min | 1 Cycle |
- 预变性时间设置在 30 sec ~ 5 min，若模板 GC 含量较高可适当延长预变性时间至 5 min。
- 根据引物 Tm 调整退火温度（推荐温度 55 ~ 65℃)。
- 延伸时间根据 PCR 产物的长度确定。
- 退火、延伸循环数可以根据模板的起始量以及需要的产物量进行调整。以 4 ng 人基因组DNA（或 5 mm 血卡）为模板，延伸 45 sec，扩增 30 个循环能实现约 1 μg 的产物积累。