产品简介 miRcute 增强型 miRNA cDNA 第一链合成试剂盒采用加 A 法来进行 miRNA 第一链 cDNA 的反转录。本试剂盒采用了双组分形式，简化了实验操作流程，降低了操作失误的可能性。本产品中的 miRNA RT Enzyme Mix 包含了 E.coli Poly(A) Polymerase、RTase 和 RNasin。其中的 E.coli Poly(A) Poly merase 不但具有高效的加 A 尾效率，还可特异性识别单链miRNA，从而避免了具有双链结构的 miRNA 前体的进一步逆转录反应；RTase 经过分子改造，去掉了 RNase H 活性，增加了 RNA 模板亲和力，从而使得 miRNA 的逆转录反应具有更高的效率和灵敏度。本产品中的 2× miRNA RT Reaction Buffer 包含了 miRNA 加 A 尾反应和逆转录反应的所有原料和引物，并经过精心优化，可保证 miRNA 3’末端的 Poly(A) 修饰过程和逆转录过程同时高效进行。 产品特点 ■ 省时省力：加 A 尾反应和逆转录反应合二为一，在减少操作步骤的同时也节省了一半的反应时间。
■ 特异性强：只针对单链的 miRNA 进行修饰和逆转录反应，避免具有二级结构的 miRNA 前体的影响。
■ 灵敏度高：miRNA 的加 A 产物可全部进行进一步的逆转录反应，大大提高了低丰度miRNA 的检出率。
■ 适用广泛：可针对几乎所有材料提取的 miRNA 进行逆转录反应，模板的使用范围可达 20 pg-2 µg( 质量范围 ) 和 10 fM-100 pM ( 浓度范围 )。 下游应用 染料法 / 探针法 miRNA 的荧光定量研究 注意事项 注：本试剂盒须与miRcute Plus miRNA荧光定量检测试剂盒(FP411)配套使用
实验结果
图1. 使用TIANGEN miRcute 增强型miRNA cDNA 第一链合成试剂盒(KR211) 分别与国外知名Q 公司( 左) 和国内T 公司( 右) 的同类产品反转录人类miRNA mimics mix，之后用荧光定量检测hsa-miR-133a-3p。结果显示，对于同一RNA 样本，与竞品( 蓝色线)相比TIANGEN KR211( 红色线) 反转录之后得到的cDNA 量更大。KR211 具有更高的反转效率。
miRNA mimics mix 上样量：2×10⁸ copies；反转录体系：20 μl，取2 μl 定量；定量试剂：TIANGEN miRcute 增强型 miRNA 荧光定量检测试剂盒(SYBR Green) (FP411)；使用仪器：ABI 7500 fast。

图2. 使用TIANGEN miRcute 增强型miRNA cDNA 第一链合成试剂盒(KR211，上排) 与国外知名Q 公司(下排) 的同类产品分别反转录人类Total RNA，之后用荧光定量检测hsa-miR-122-5p。结果显示，对于同一RNA 样本，与竞品相比TIANGEN KR211 具有更高的
灵敏度和稳定性，更适合下游实验。

Human Huh7 细胞Total RNA 提取采用TRNzol Universal (DP424)。反转录上样量：100 ng-1 pg；反转录体系：20 μl，取2 μl 定量；定量试剂：TIANGENmiRcute 增强型 miRNA 荧光定量检测试剂盒(SYBR Green)（FP411）；使用仪器：ABI 7500 fast。