产品名称：外泌体提取纯化试剂盒-柱纯法（细胞上清、尿液、植物等）

产品用途：采用阴离子交换色谱法，适用于细胞上清、尿液、植物等样本中的外泌体提取纯化，试剂盒可以提取 100ml 细胞上清液；

产品介绍：

外泌体是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子；然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。 外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。

宇玫博生物自主开发的外泌体提取纯化试剂盒-柱纯法，适用于细胞培养上清液（也可用于尿液）中的外泌体提取纯化，试剂盒采用阴离子交换色谱法原理，与被分离样品中带负电荷的外泌体相结合，从而实现外泌体的分离。该试剂盒具有快速、高效、获得的外泌体纯度高等特点，可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

组分说明：

产品优势：

外泌体提取纯化试剂盒-柱纯法适用于细胞培养上清液、尿液等非粘稠性样本中的外泌体提取纯化。

方便快捷：提取过程不需要高速离心机，上样到获得外泌体仅需 1h

稳定性高：无剪切力，保留外泌体的完整性和生物活性

纯度高：层析法纯度更高，回收率 30%，粒径均一且重复性好

质控数据：

实验方法

一、 样品预处理

1、 取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后置于 4℃解冻，融化后置于冰上；如果是新鲜样品，收集样品后直接置于冰上；
2、 样品处理量（单个柱子处理量）：

注：每个 “Exosome Extraction Column” 处理量 10~20 mL（未经浓缩的原始上清），样品过少可能导致获得的外泌体浓度低，样品过多可能导致堵柱。
3、 离心去细胞：样品于 4℃ 以 300 ×g（~1,640 rpm**）离心 5 min，去除样品中的细胞；**为约10 cm 有效离心半径的大离心机换算（≥15 mL 离心管），下同。
4、 离心去细胞碎片：将去除细胞后的样品于 4℃ 以 3,000×g（~5,200 rpm**）离心 10 min，去除样品中的细胞碎片（注：若沉淀较多，可 3,000 ×g，10 min 离心多次至无明显沉淀，每次取离心上清液）；
5、 上清液过滤：去除细胞碎片的离心上清液用 0.45 μm 或 0.22 μm 过滤器过滤至新的容器中。

二、 提取前准备

1、 固定外泌体提取柱（Exosome Extraction Column）：取出提取柱，将提取柱上下筛板取下后垂直固定于试管架或铁架台上，待填料保存液自然流尽；
2、 加入 Solution A 溶液：填料保存液流尽后沿柱子内壁缓慢加入 5 mL Solution A 溶液，待 Solution A 溶液自然流尽；
3、 加入 Solution B 溶液：Solution A 流尽后沿柱子内壁缓慢加入 5 mL Solution B 溶液，待 Solution B 溶液自然流尽，等待上样。

三、 提取外泌体

1、 过柱：将经 0.45 μm 或 0.22 μm 过滤器过滤后的细胞上清液沿柱子内壁缓慢多次加入提取柱中，待细胞上清液自然流尽（注：每个“Exosome Extraction Column”上样量 10~20 mL（未经浓缩的原始上清），样品过少可能导致获得的外泌体浓度低，样品过多可能导致堵柱）；
2、 平衡：细胞上清液流尽后沿柱子内壁缓慢多次加入 15mL Solution B 溶液，待 Solution B 溶液自然流尽；
3、 洗杂：Solution B溶液流尽后沿柱子内壁缓慢加入 0.8mL Solution C 溶液，待 Solution C 溶液自然流尽；
4、 洗脱：待上步骤中 Solution C 溶液流尽后沿柱子内壁再次缓慢加入 1 mL Solution C 溶液，收集该流穿液（该流穿液中富含外泌体颗粒）；
5、 浓缩（选做）：若外泌体浓度过低，可用 100 KD 超滤柱将流穿液适当浓缩；
6、 纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃ 以 3,000×g（~6,200 rpm*）离心 10 min，离心后收集 EPF 柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体（注：EPF 柱不可重复使用）；*为约 7 cm 有效离心半径的小离心机换算（≤2 mL 离心管）。
7、 外泌体的保存：纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于 -80℃ 低温冰箱中，以备后续实验使用。

操作视频

注意事项：

1、 新的 Exosome Extraction Column 柱子的上筛板和填料表面之间可能存在一定的空隙，该现象是运输过程中晃荡造成的，并不影响其性能，实验前将筛板向下推动至填料表面即可；
2、 Exosome Extraction Column 和 Exosome Purification Filter 均为一次性耗材，请勿重复利用，否则可能会造成堵柱而损失样品；
3、 Solution C 为 Tris 缓冲盐溶液；
4、 流穿液呈红色，是由于培养基中色素和外泌体同时被洗脱所致，不影响后续实验。若需去除色素，可使用 100KD 超滤柱置换缓冲液；

QA

Q1：收获的外泌体样品呈红色，是否影响后续使用？

A1：不影响！收获的外泌体样品呈红色，是由于培养基中色素或维生素同外泌体同时被洗脱所致，不影响后续实验。若需去除，可使用100 KD超滤柱置换缓冲液。

Q2：上样过程中样本无法流穿柱子或者流速非常慢？

A2：请停止上样！这是由于样本中大颗粒物质未去除干净造成的，所以上样前样本请务必使用0.45 μm或0.22 μm滤器过滤。

经典案例：