试用联系时间：会在收到申请信息后 1-2 周内安排联系，试用发放时间会结合您的实验情况安排，欢迎大家来申请~

Umibio 助力科研，Umibio 的外泌体提取试剂盒植物囊泡提取纯化试剂盒针对不同样本类型提供了试用装，如多汁植物、粘稠汁液植物、干品植物等，可高效释放植物组织中的囊泡，并去除植物组织中的非囊泡成分，获得的植物囊泡。

以植物囊泡提取纯化试剂盒（多汁植物）为例

产品组成：

操作规程：
一、 榨汁前准备
1、 榨汁机消毒：将榨汁机各部件拆分开，喷洒 75%酒精仔细擦拭后，放入生物安全柜紫外消毒至少 20 min；
2、 样品准备：按照试剂盒处理量准备待提取样品；
注：试剂盒处理量

3、 样品消毒：将待提取的植物干品倒入烧杯中，一起放入生物安全柜紫外消毒至少 20 min；
4、 样品处理：将新鲜的待提取植物洗净外表皮后，用无尘布擦干，放入生物安全柜紫外消毒至少 20 min 后，将植物切成方便榨汁的小块；

注：

a. 皮厚的植物（如葛根）需要先洗净外皮、消毒后去皮切小块或削成薄片；
b. 皮薄的植物（如三七、地黄、姜黄）可以洗净外皮，消毒后直接切小块，准备榨汁。

二、 榨汁
1、 榨汁机准备：在生物安全柜下，将完成消毒的榨汁机部件按照榨汁机说明书组装；
2、 榨汁：将切好的植物小块投入榨汁机榨汁，质地偏硬的植物注意少量多次，收集植物汁液，榨汁完成。
注：如需控制内毒素，榨汁过程请在生物安全柜内进行。

三、 离心去杂
1、 低速离心去杂：将榨汁后的汁液于 4℃，5,000 ×g，10 min 离心，收集上清；
2、 高速离心去杂：将低速离心后收集的上清于 4℃，10,000 ×g，10 min 离心，收集上清。

四、 提取囊泡
1、 上清液预处理：在去除杂质后的植物汁液中加入混匀的 Solution A 试剂，添加剂量如下（其他剂量可按添加比例换算）：

注：Solution A 试剂使用前需混匀。
2、 混合孵育：加入 Solution A 试剂后盖好管盖，颠倒混匀 8~10 次，将混合液 37℃水浴 16 h 左右（过夜）；
3、 调 pH：将孵育好的混合液取出，在生物安全柜下用试剂盒自带的 1M NaOH 和 1%柠檬酸将混合液 pH 调至 7.0；
4、 高速离心去杂：将调 pH 后的上清 4℃，10,000 ×g，20 min 离心后收集上清；
5、 过滤：将收集到的上清依次经 1 μm 滤膜和 0.45 μm滤膜过滤；
注：如需获得 30-1000 nm 植物囊泡，可只进行 1 μm滤膜过滤，不进行 0.45 μm 滤膜过滤。
6、 加提取试剂：取上步离心上清液加入Solution B试剂，添加剂量如下（其他剂量请等比例换算）：

7、 二次混合孵育：加入 Solution B 后拧紧管盖，通过涡旋振荡器混匀 1 min，将混合液 4℃静置 4 h 左右；
8、 沉淀植物囊泡：取孵育好的混合液，于 4℃，10,000×g，60 min 离心，弃上清，将含有沉淀的离心管再次于 4℃，10,000 ×g，2 min 离心后，吸尽上清；
注：沉淀中富含植物囊泡，需尽可能吸尽上清液。
9、 植物囊泡重悬：取合适量的 1×PBS 均匀吹打离心沉淀，待其溶解后，将重悬液转移至新的 1.5 mL EP 管中（建议每 20 mL 植物汁液用 400 μL 左右 1×PBS重悬）；
10、 植物囊泡收获：将含有重悬液的 1.5 mL EP 管于 4℃，12,000 ×g 离心 2 min，保留上清液，其中富含植物囊泡颗粒；
注：若沉淀较多，可 12,000 ×g，2 min 离心多次至无明显沉淀，每次取上清。

五、 纯化和保存植物囊泡
1、 纯化植物囊泡：将收获的植物囊泡颗粒粗品转入Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于4℃，3,000 ×g 离心 10 min，离心后收集 EPF 柱管底的液体，此液体即为纯化后的植物囊泡颗粒；
注：a. EPF 柱不可重复使用；
b. 如需获得大颗粒植物囊泡，可不进行该步骤。
2、 植物囊泡保存：将纯化后的植物囊泡以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。

结果展示：

注意事项
1、 2 T 试剂盒内的 Solution A 溶液，收到后尽快放-20℃保存，使用前 4℃解冻，解冻后 1 个月内用完，禁止反复冻融。
2、 20 T 试剂盒内的 Solution A 溶液，收到后可以按照单次使用量分装，保存在-20℃，使用前取出解冻。
3、 Solution A 试剂静置有棕黄色沉淀，属于正常现象，使用前需混匀。
4、 若对内毒素有严格要求，榨汁步骤请严格在生物安全柜下进行，关键用品和仪器注意消毒后使用。
5、 纯化后的植物囊泡可保存在-80 ℃冰箱中，避免反复冻融导致植物囊泡破裂。