Rat TNF-α ELISA Kit，Valukine™

大鼠 TNF-α ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL902
适用于定量检测天然和重组大鼠 TNF-α的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

18
I. 背景
肿瘤坏死因子α (TNF-α)，也被称为cachectin和TNFSF1A，是TNF超家族的原型配
体(1)。它是一种多效分子，在炎症、免疫系统发育、凋亡和脂质代谢中起核心作用(2-5)。
TNF-α也参与许多病理状态，包括哮喘、克罗恩病、类风湿关节炎、神经病理性疼痛、
肥胖、2型糖尿病、感染性休克、自身免疫和癌症(5-11)。
大鼠TNF-α生成为26 kDa II型跨膜蛋白，由35个氨基酸(aa)的胞质结构域、21个aa
跨膜片段和156个aa胞外结构域(ECD)组成(12)。在ECD中，大鼠TNF-α与小鼠的同源
性为95%，与牛、犬、棉鼠、马、猫、人、恒河猴和猪TNF-α的同源性为73%-79%。它
是由多种免疫细胞、上皮细胞、内皮细胞和肿瘤细胞产生的。TNF-α在细胞内组装形成
非共价连接的同源三聚体，并在细胞表面表达 (13)。细胞表面TNF-α可诱导肿瘤细胞裂
解和病毒感染细胞裂解，并通过可溶性TNF RI连接产生其自身的下游细胞信号(14, 15)。
通过TACE/ADAM17脱落膜结合的TNF-α释放生物活性细胞因子，一个55 kDa可溶性的
TNF-α胞外域三聚体(16-18)。
TNF-α结合普遍存在的55-60 kDa的TNF RI (19, 20)和造血细胞限制性的78-80
kDa的TNF RII (21, 22)，两者也以同源三聚体的形式表达(1, 23)。I型和II型受体与TNF-α
具有相似的亲和力，并能促进NFκB活化(24-27)。然而，只有TNF RI包含一个细胞质死
亡结构域，该结构域可触发凋亡的激活(3, 28)。这两种受体的可溶性形式被释放到人血
清和尿液中，并能中和TNF-α的生物活性(29-31)。

19
II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗大鼠TNF-α抗体包被于微孔板上，样品和标准
品中的大鼠TNF-α会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化
的抗大鼠TNF-α检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的
辣根过氧化物酶（Streptavidin-HRP）孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物
溶液（显色剂）。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光
度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和大鼠血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的大鼠 TNF-α，测定其回收率。回收率范
围在 106.5-118.1%，平均回收率在 111.6%。
在大鼠血清样本中掺入检测范围内不同水平的大鼠TNF-α，测定其回收率。回收率范围
在97.4-110.8%，平均回收率在108.3%。
C. 灵敏度
大鼠TNF-α的最低可测剂量（MDD）一般小于3.17 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的大肠杆菌表达的高纯度重组大鼠TNF-α蛋白
所校正。

G. 特异性
将以下因子配制成50 ng/mL的浓度来检测没有观察到明显的交叉反应或干扰。
Recombinant human Recombinant porcine
TNF-α TNF-α
TNF-β
含50 ng /mL重组小鼠TNF-α的样品检测值为1200 pg/mL (2.4%的交叉反应性)。