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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
| E2 Select Ubiquitin Conjugation Kit重组人泛素结合酶筛选试剂盒 | 20440ES10 | 10 T |
产品简介
泛素化是通过三个酶促步骤实现的。在ATP依赖的过程中，泛素激活酶(E1)催化与泛素形成活性硫酯键，然后转移到泛素载体蛋白的活性位点半胱氨酸(E2)。泛素级联对特定底物蛋白的选择性依赖于E2结合酶(细胞中包含的相对较少)和泛素-蛋白连接酶(E3)之间的相互作用，迄今为止已经鉴定出600多种这种酶。E3s是一个大的，多样化的蛋白质组，其特征是几个确定的基序之一。这些包括HECT(与e6相关蛋白c端同源)，RING(真正有趣的新基因)或U-box(没有Zn2+结合配体的完整补充的修饰的RING基序)结构域。而HECT E3s在泛素化过程中具有直接的催化作用，RING和U-box E3s促进蛋白质泛素化。 后两种E3类型充当适配器类分子。 它们使E2和底物足够接近，从而促进底物的泛素化。虽然许多RING-type e3，如MDM2和c-Cbl，可以单独发挥作用，但其他一些是作为更大的多蛋白复合体的组成部分，如后期促进复合体。综上所述，这些多面的特性和相互作用使E3s能够利用泛素-蛋白酶体系统，在真核生物的所有细胞中提供一种强大而具体的蛋白质清除机制。该筛选试剂盒集合了11种常用E2结合酶，可以筛选具有E3连接酶活性的蛋白所匹配的E2酶.
产品性质
| 来源(Source) | E.coli |
| 分子量(Molecular Weight) | Ubiquitin约10 kDa，E1酶大约116 kDa，E2s11种，E3酶大约102kDa,底物蛋白大约40.7kDa。 |
| 外观(Physical Appearance) | 泛素蛋白冻干粉，其他是液体； |
| 标签(Tag) | None |
| 纯度(Purity) | > 95% by SDS-PAG |
| 储存液(Stock) | 0.88 mg/ml (25 µM) in 50 mM HEPES pH 7.5, 200 mM NaCl, 10% Glycerol. |
| 浓度(Concentration) | 见管外标签 |
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 规格 |
| 20440-A | 10 × Reaction Buffer | 200 μL |
| 20440-B | 10 × E1 Enzyme (His-tag) | 200 μL |
| 20440-C | 5 × Ubiquitin （冻干粉中加 400μL 水） | 400 μL |
| 20440-D | 10 × Mg2+ -ATP | 200 μL |
| 20440-E | 10 × E3 Ligase Itch (Positive control) | 20 μL |
| 20440-F | 20 × S5a substrate (Positive control) | 20 μL |
| 20440-G | 20 × UBE2R1/UbcH3/Cdc34 (2R1) | 15 μL |
| 20440-H | 20 × UBE2N/UBE2V2 Complex (2N/2V2) | 15 μL |
| 20440-I | 20 ×UBE2D1/UbcH5a (D1） | 15 μL |
| 20440-J | 20 × UBE2D2/UbcH5b (D2) | 15 μL |
| 20440-K | 20 ×UBE2D3/UbcH5c (D3) | 15 μL |
| 20440-L | 20 × UBE2L3/UbcH7 (2L3) | 15 μL |
| 组分 | 体积 |
| ddH2O | Up to 20 μL |
| 10 × Reaction Buffer | 2 μL |
| 10 × E1 Enzyme | 2 μL |
| 5 × Ubiquitin | 4 μL |
| 10 × ATP-Mg | 2 μL |
| 20 × E2 Enzyme | 1 μL |
| E3 Ubiquitin Ligase* | 2 μL |
| Substrate(可选)* | 1 μL |
阳性对照反应体系(20 μL)
| 组分 | 体积 |
| ddH2O | to 20 μL |
| 10 × Reaction Buffer | 2 μL |
| 10 × E1 Enzyme | 2 μL |
| 5 × Ubiquitin | 4 μL |
| 10 × ATP-Mg | 2 μL |
| 20 × E2 Enzyme | 1 μL |
| 10 × E3 Ligase Itch (Positive control) | 2 μL |
| 20 × S5a substrate (Positive control) | 1 μL |
反应条件
37℃孵育(30min~2h，如果效果不明显可增加反应时间12h)，建议使用PCR仪或金属浴.
结果检测
- 取样品20 μL加入5 μL的5×SDS-PAGE Buffer，加热样品95 ℃ 5min，随后使用还原性(含DTT)上样缓冲液进行SDS-PAGE电泳分析；
- 选择E3 Ubiquitin Ligase、泛素、Substrate抗体进行Western Blot分析.
储存条件
-25~-15℃保存
注意事项
1. 避免反复冻融。
2. 本产品仅作科研用途。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。 Ver.CN20240126