产品信息

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Hifair® V NCP Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit	13113ES60	100 T	2782.00
Hifair® V NCP Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit	13113ES80	1000 T	21832.00
Hifair® V NCP Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit	13113ES92	10000 T	168882.00

产品描述
Hifair^® V NCP Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作。

本试剂盒利用耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用适配体热启动Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的MP Buffer，Enzymes Mix等，缓冲液中已含有Mg²⁺和dNTP等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够保证引物扩增效率的同时，进行多达四重的反应。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		13113ES60 (100 T)	13113ES80 (1000 T)	13113ES92 (10000 T)
13113-A	2×Hifair® V NCP MP Buffera,b	1.2 mL	6 mL ×2	120 mL
13113-B	Hifair® V NCP Enzyme Mix c	100 μL	1 mL	5 mL×2
13113-C	RNase Free H2O	1.2 mL	6 mL ×2	120 mL

【注】a) 2×Hifair^® V NCP MP Buffer为Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。
b) 不含Rox reference dye。如需，推荐使用货号10200ES产品。
c) Hifair^® V NCP Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、配体法热启动Taq DNA Polymerase。

适用机型
ABI系列：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;
Bio-Rad系列：Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Roche系列：Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
其他系列：Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;
Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.
运输与保存方式

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作
 
反应体系

组分	体积（μL）	体积（μL）	终浓度
2×Hifair® V NCP MP Buffer	12	15	1×
Hifair® V NCP Enzyme Mix	1	1.5	-
Primer/Probe Mix (10 μM)	1-4	1-4	0.4 μM
模板RNA	1-5	1-10	-
RNase Free H2O	To 25	To 30	-

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

1. 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.4 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。
2. 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。
d) 反应体系：推荐使用25 μL、30 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃a	10 min	1
2	预变性	95℃	5 min	1
3	扩增反应	95℃	15 sec	45
		60℃b	30 secc

【注】                                                                                             

1. 逆转录：42℃或者50℃均可，时间10-15 min。
2. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60℃。

c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

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Murine RNase inhibitor (40U/μl) 鼠源RNase抑制剂	10603ES60	200KU	7796.00
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Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG	10303ES76	500U	3083.00
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dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM）	10128ES80	1mL	853.00

HB200210