数字PCR

数字PCR可精准实现核酸分子绝对定量的技术，精确确定质粒质量、病毒滴度、载体拷贝数、可靠的污染监测，例如支原体和宿主细胞DNA残留检测，为CGT相关产品的成功研发和安全生产保驾护航。QIAGEN以QIAcuity dPCR系统为主体的一系列解决方案。

【CGT Viral Vector Lysis Kit】

CGT Viral Vector Lysis Kit提供了从腺相关病毒 (AAV) 样品裂解到病毒滴度定量的完整标准化工作流程。它摒弃了费力的纯化步骤，其改进的配方将QIAGEN强大的样品处理和定量能力相结合，特别适用于不同纯度（例如：生产阶段样本、高度纯化的病毒载体样本）及不同血清型AAV样本（例如：AAV1, AAV2、AAV5、AAV6、AAV8和AAV9）的纯化。同时，搭配使用QIAcuity CGT dPCR Assay，可愈加简单地实现AAV病毒滴度的一致、准确、精确、高度可重复的定量。

【QIAcuity CGT dPCR Assay】

QIAcuity CGT dPCR Assay，基于QIAcuity dPCR系统而开发，以实现AAV精确定量。

10种常见靶标基因，每种具有3种荧光基团（FAM/HEX/CY5）可供选择；

• 双淬灭探针设计，减少背景信号以获得最佳性能

• 避免AAV产品批次误差，保证批次间CV＜10%

• 不依赖于标准品，具有更高的数据重复性和准确性

• 支持单重和多重检测，具有客户定制功能，最多可实现5重dPCR检测

动态范围广，精确度高

AAV2 样本DNA 经连续稀释后利用QIAcuity CGT dPCR FAM Assay 进行检测。DNA 上样量为2.5-15000copies/μl。采用8.5k 纳米微孔板进行检测，相关系数大于0.99。所有Assay 的变异系数均小于4%。

【QIAcuity resDNA Quant Kit】

QIAcuity resDNA Quant Kit，基于QIAcuity dPCR系统而开发，适用于3种常见细胞系（CHO、E.coli、HEK293）的宿主细胞DNA残留精确检测。

• 内含阳性及内参对照，多拷贝靶标分析确保结果不受宿主细胞DNA碎片水平的影响

• 与qPCR相比具有更高的检测灵敏度（检出限可低至5 fg）

• 即使在PCR污染物和其他抑制剂存在的情况下，也能提供准确的宿主细胞DNA定量结果

在低上样量的情况下，QIAcuity大肠杆菌ResDNA 定量试剂盒（dPCR）可提供更高的准确度反应设置参考制造商的实验流程，结果代表重复样本的平均值* 低于某厂商大肠杆菌定量试剂（qPCR）的动态范围。

【QIAcuity dPCR系统】

QIAcuity集成式数字PCR系统，将微反应制备、PCR扩增和数据分析集成到全自动仪器中，整个流程只需一步手工操作，即可在2小时内快速获得实验结果。在提升检测速度和操作简便性的同时，也很大程度减少由于人工操作不当等外界因素引入的实验误差。同时，搭配QIAgility全自动体系构建系统，可实现dPCR反应体系的自动化配置，更大程度上减少人工操作，提高工作效率。此外，配套软件QIAcuity Software Suite，专为满足21CFR Part 11 规定的要求而设计。

【总结】

在细胞和基因治疗的整个质控流程，QIAGEN可实现CD3、CD28和ICOS等外源目的基因、AAV病毒滴度、残留宿主细胞、总细胞量、支原体和大肠杆菌的检测，所有Assay均经过严格的湿实验验证，确保其检测特异性和灵敏度。同时，更有EndoFree Plasmid Kit，将高效的内毒素去除步骤整合到质粒纯化流程中，得到的DNA高度适用于可重复且结果可靠的转染。

聚焦生物制药，QIAcuity大有可为，QIAGEN凭借其强大的研发实力，提供完整的、集成式的解决方案，以促进细胞和基因治疗行业的蓬勃发展。