尿液外泌体核酸提取试剂盒（磁珠法）

产品名称】

通用名称：核酸提取或纯化试剂（磁珠法）

【包装规格】

50人份/盒

【预期用途】

主要用于甲基化分析中核酸的提取、富集、纯化等步骤。其处理后的产物用于临床体外检测使用。

【检验原理】

在人体尿液中，外泌体核酸通常以小片段的形式存在，本产品应用二氧化硅磁珠技术，具有选择性结合特性，可高效回收核酸片段，通过多个清洗步骤和DNase除去杂质和DNA，从尿液中高效纯化外泌体RNA，纯化的RNA产量高。

【主要组成成份】

【贮存条件及有效期】

贮存于2°C-30°C干燥的环境中，有效期限为24个月。

【适用仪器】

转速可达12000rpm以上的高速离心机、磁力架、迷你低速离心机、漩涡混合器。

【样本要求】

1.      样本类型：人体尿液样本。

2.      样本的采集：使用15ml离心管，按照生产厂家建议收集尿液10mL。尿液保存在4℃以下。

【操作步骤】

1、试剂准备

   试剂盒使用前，请确保裂解液完全溶解无结晶析出。

2、样本准备(外泌体分离)

如果是冰冻的尿液样本，将其置于室温（15-30℃），待其完全融化后，将尿液放至低速离心机中，3500rpm离心15min，去除杂质；取上清转移到两个1.5ml离心管各1ml，每管分别加入400µL外泌体分离液，涡旋混匀10s，放至高速离心机中，12000rpm离心10min，吸除上清。（注意：要尽量吸除多余液体，以免影响核酸提取）

3、外泌体核酸的提取和纯化

3.1外泌体核酸裂解

向上述离心管分别加入155µL裂解液，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，室温静置5min后将两管混合液混合成一管共310µL，依次加入270µL乙醇、10µL磁珠，涡旋混匀10s，室温放置10min（每2min上下颠倒5次，使磁珠分布均匀），低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；

3.2核酸洗涤

向上述1.5mL离心管中加入600µL洗液一，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；

向上述1.5mL离心管中加入600µL洗液二，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；

3.3消化外泌体DNA

   在离心管中加入60µL DNase，漩涡混匀器混匀10s，室温静置15min，待DNA消化完全；

3.3核酸RNA洗涤

结束后，向上述1.5mL离心管中加入600µL洗液二，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；

向上述1.5mL离心管中加入600µL洗液三，涡旋混匀10s，低速瞬时离心，放入磁力架磁吸2min，丢弃废液；

将上述1.5mL离心管低速瞬时离心，放置磁力架上，磁吸1min，吸走多余的废液，打开上述1.5mL离心管盖，室温干燥2min；

3.4核酸RNA洗脱

向上述1.5mL离心管中加入30-60µL洗脱液，盖紧管盖，涡旋混匀10s，室温静置3min，每隔1min用漩涡混匀器混匀5s（使磁珠分布均匀），低速瞬时离心，把离心管放置磁力架上，磁吸2min，将试剂转移至新的1.5mL离心管，盖紧管盖。如果提取的核酸不立即使用，可将其置于-20°C以下储存。

【检测方法的局限性】

1、只能用于体外诊断。

【性能指标】

经本试剂盒提取的核酸，检测Ct值的CV≤5.0%。

【注意事项】

1. 实验前请仔细阅读本说明书。

2. 为了避免样本中任何潜在的生物危险，检测样本应视为具有传染性物质，避免接触到皮肤和黏膜；样本的处理建议在可防止气雾外流的生物安全柜中操作；样本制备区所用过的试管、吸头需打入盛有消毒剂的容器，并与废物一起灭菌后方可丢弃；样本操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。

3.为保证实验结果的准确性和可靠性请使用已校准的移液器，选用合格的一次性使用的反应管、离心管、枪头等进行样本处理及配液等操作，所有用具应不含DNA酶和RNA酶。

4. 试剂盒组分需在效期内使用，不使用本试剂盒提供的组分进行实验将可能导致错误结果。

5. 实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，实验人员必须进行专业培训，实验过程严格区分进行（试剂准备区、样本制备区、扩增区），实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不能交叉使用。

6. 完成样本核酸提取后，建议马上进行下一步实验，否则请保存于-20℃待用（24小时内）。

7. 实验结束后用10%消毒水和75%酒精处理工作台和移液器，然后用紫外灯照射20-30min。

粤穗械备20181281号