HM10001 HumanTumor necrosis fa

Catalog : HM10001
Detection Range : 12.5pg/ml-1000pg/ml

用途

 

本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中肿瘤坏死因子α（TNF- α）的含量。

 

检测原理

 

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。用纯化的人肿瘤坏 死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子 α（TNF-α），再与HRP标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合 物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终 的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α（TNF-α）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定 吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。

 

反应类型				夹心法
规格				96T
反应时间				2h
反应性				人
样本类型				血清、血浆或其他相关生物液体

 

 

特异性

 

可检测样本中的人肿瘤坏死因子α（TNF-α），且与其它相关蛋白无明显交叉反应

 

 

重复性

 

板内变异系数≤9%,板间变异系数≤11%

 

 

试剂盒组成及保存

 

规格		96T
说明书		1份
封板膜		2 片（96）
96孔酶标板		1×96
检测抗体(Detection Antibody)		1.5ml×1 瓶
酶标试剂(Enzyme Reagent)		6ml×1 瓶
标准品(Standards)：2000pg/ml		0.6ml×1 瓶
测定稀释剂(Assay Diluent)		2 ml×1 瓶
显色剂 A 液(Substrate Solution A)		6 ml×1 瓶
显色剂 B 液(Substrate Solution B)		6 ml×1 瓶
终止液(Stop Solution)		6ml×1 瓶
浓缩洗涤液(Wash Buffer )		（20ml×30 倍）×1 瓶

 

保存温度：2-8°C 

 

实验室所需物品

 

需要而未提供的试剂和器材

1.吸光度值在450nm波长下检测的酶标仪

2.1-2ml的加样器

3.100 ml和1L的量筒

4.吸水纸

5.37°C 恒温箱

6.蒸馏水或去离子水

7.数据分析和绘图软件，图纸

8.标准和样品稀释的试管‍

 

操作步骤

 

 

1. 标准品的稀释：准备小试管 6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液 100ul，然 后取原浓度标准品 100ul 加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取 100ul 加入第二 支试管中，充分混匀；再在该试管中取 100ul 加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取 100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取 100ul 加入第五只试管中，充分混匀；然 后在该试管中取 100ul，弃掉。第六只试管作为 0 号标准品。稀释后各管浓度分别是： 1000pg/ml,500pg/ml,250 pg/ml,125 pg/ml,62.5pg/ml ,0 pg/ml。；

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品、酶标试剂及生物素标记的抗 TNF-α抗体，其余各 步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品 40μl，然后再加生物素标记 的抗 TNF-α抗体 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；

3.  

   加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

4. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

5.  配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。

6.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次， 拍干。

7. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分 钟。

8. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

9. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

10.  检测范围：12.5pg/ml-1000pg/ml。

11. 灵敏度：≤2.5pg/ml
    
    参考文献
     

    1、

    文献链接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0048969721062951

    文献题目：Inflammatory and oxidative stress responses of healthy elders to solar-assisted large-scale cleaning system (SALSCS) and changes in ambient air pollution: A quasi-interventional study in Xi'an, China.

    发表期刊：Science Of The Total Environment

    影响因子（IF）：7.963

    DOI: 10.1016/j.scitotenv.2021.151217

    出版信息：Sci Total Environ. 2021 Oct;:151217

     

    2、

    文献链接：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/ejn.15607

    文献题目：LncRNA NONRATT009773.2 promotes bone cancer pain progression through the miR-708-5p/CXCL13 axis

    发表期刊：European Journal Of Neuroscience

    影响因子：3.386

    DOI：10.1111/ejn.15607

    出版信息：2022 Feb 01

     

    3、

    文献链接：https://www.hindawi.com/journals/omcl/2020/8868564/

    文献题目：Hydrogen Sulfide Protects Retinal Pigment Epithelial Cells from Oxidative Stress-Induced Apoptosis and Affects Autophagy

    发表期刊：Oxidative Medicine and Cellular Longevity

    影响因子：5.076

    DOI：10.1155/2020/8868564

    出版信息：Oxid Med Cell Longev. 2020;2020:8868564
    
    
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