人重组激活基因1(RAG-1)ELISA试剂盒

人重组激活基因1(RAG-1)ELISA试剂盒

实验原理

1. 抗体或抗原的吸附：将待测抗原或抗体吸附到固相载体上，常用的载体有微孔板、玻璃纤维、聚苯乙烯等。这些载体表面具有特殊的化学基团，能够与待测抗原或抗体特异性结合。
2. 酶标记的抗体或抗原的结合：将酶标记的抗体或抗原与待测抗原或抗体结合，形成酶标记的抗原-抗体复合物。酶标记的抗体或抗原具有高度的特异性和亲和力，能够与待测抗原或抗体形成稳定的复合物。
3. 底物显色反应：当酶标记的抗原-抗体复合物与底物溶液接触时，酶能够催化底物分解，产生颜色变化。通过测量颜色的变化程度，可以判断待测抗原或抗体的浓度。




试剂盒性能

检测范围：5 pg/mL – 160 pg/mL。
灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。
特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。



样品收集、处理及保存方法

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。



试剂盒组成
 

实验步骤

1. 准备试剂盒：将试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟以上，使试剂盒恢复至室温。
2. 加样：分别向各孔中加入标准品、待测样本和空白孔，每孔加入50μl。
3. 孵育：用封板胶纸封住反应孔，轻轻振荡混匀，37℃孵育1小时。
4. 洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液充分洗涤4-5次，每次30秒。
5. 加酶标二抗：每孔加入50μl酶标二抗溶液，轻轻振荡混匀，37℃孵育30分钟。
6. 洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液充分洗涤4-5次，每次30秒。
7. 加底物：每孔加入50μl底物溶液，轻轻振荡混匀，37℃孵育15-20分钟。
8. 终止反应：每孔加入50μl终止液，轻轻振荡混匀。
9. 读数：用酶标仪在450nm波长处读取各孔的光密度值。



结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。



操作注意事项

1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为 0 的标准品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。
7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。



洗板方法

1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。



相关产品

 
​​​​