一、简介 试剂盒用于直接检测猪血清和血浆中猪瘟病毒抗体，评估猪瘟疫苗免疫状况，感染猪的血清学诊断，是一种快速、简单、特异的检测方法。二、实验原理 猪瘟病毒抗体阻断 ELISA 是将重组 E2 糖蛋白包被在酶标板上，加入样品后，样品中如果存在抗 E2 糖蛋白的抗体，在加入辣根过氧化物酶标记的抗 E2 糖蛋白抗体以及显色底物后，因抗体阻断了抗 E2 糖蛋白抗体的结合，所以导致颜色将不会加深。颜色的深浅与血清样品中的抗 E2 糖蛋白特异抗体的量呈负相关。样品的 OD 值同阳性对照以及阴性对照比较后可得出血清样品的阻断率。三、试剂盒内容
四、自备材料微量移液器(0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL)、一次性移液器吸头、试管、蒸馏水或去离子水，酶标仪，手动或自动洗涤设备。五、实验准备1. 试剂盒各个组分在使用前均须恢复至室温（21℃±5℃），试剂应轻轻旋转或振荡均匀。2. 用去离子水将浓缩洗涤液(10X)、浓缩稀释液(10X)，进行 10 倍稀释。3. 取出包被的微量酶标板，并做好阴、阳性对照品和样品的加样位置的标记。4. 准备动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。六、实验过程1.取准备好的血清按照以下方式进行加样。 50 uL 阴性对照（NC）加入孔 A1 和 B1。 50 uL 阳性对照（PC）加入孔 C1 和 D1。 50 uL 待测样本加入剩余其他孔。2.轻轻振匀孔中样品(注意勿溢出)，贴上封板膜，室温（21℃±5℃）下孵育 2 h。3.小心揭掉封板膜，弃去孔中液体，300uL 洗涤液清洗 2 次。每一次洗涤后，弃去孔中液体，最后一次清洗完后，在吸干材料上用力拍干孔内液体。在每一次洗涤和加入下一个试剂之前，避免孔壁变干，影响实验结果。4.浓缩酶标记抗体（10X）用稀释缓冲液（1X）进行 10 稀释（1 份浓缩液+9 份稀释缓冲液），吸取 100 uL 稀释好的酶标抗体，加入孔中。5.室温(21℃±5℃)下孵育 30 min，倒掉孔中液体，300 uL 洗涤液清洗 3 次。6.将底物 A 与底物 B 按照体积比例 1:1 混合，轻轻旋转或振荡均匀后吸取 100 uL 配置好的底物溶液，加入孔中，避光孵育 20 min。(底物溶液需现配现用)7.吸取 50 uL 终止液加入孔中，终止反应。8.酶标仪检测条件设置成波长 450nm 进行读数。七、实验有效性判断在下列情况下，即可判断实验有效：阴性对照平均 OD 大于 0.7 ODNC>0.7阳性对照平均 OD 小于阴性对照平均 OD 的 30% ODPC/ODNC<0.3八、实验结果判定对每个样品，进行阻断率的计算：
九、注意事项1.试剂盒各组分使用前，应平衡至室温，使用后放回各自保存温度进行保存。2.试剂盒开封后应尽快使用，-20℃保存样品应避免进行反复冻融。3.吸取液体时，应尽量准确，防止产生气泡。4.应严格按照各操作步骤规定的时间和温度进行操作。5.终止液可导致严重烧伤。若接触皮肤或眼睛，请立即用大量清水冲洗并就医。6.底物避免接触光照和任何氧化剂
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