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ELISA（酶联免疫吸附试验，酶联免疫试剂盒） (以下简称ELISA（酶联免疫吸附试验，酶联免疫试剂盒）) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA （酶联免疫吸附试验）法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。
本试剂盒仅供研究使用。使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中人巨噬细胞炎性蛋白1α的含量。 实验原理
本试剂盒应用间接法测定标本中人巨噬细胞炎性蛋白1α水平。用纯化的人食欲素受体(OXR)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的人巨噬细胞炎性蛋白1α标准品和未知浓度的食欲素受体(OXR)待检样品，温育后，加入生物素标记的抗 IgG 抗体，再与链霉亲和素-HRP 结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。
TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人巨噬细胞炎性蛋白1α呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人巨噬细胞炎性蛋白1α浓度。
标本要求
不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
操作步骤
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复 孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品 50μl，在样本反应孔中加入 50 微升样本，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育 45 分钟。
配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 4 次，拍干。
加生物素标记的抗-IgG 抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG 抗体 50μl。37℃温育 30 分钟
洗涤：操作同 4。
加链霉亲和素-HRP：每孔加入 50μl 的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育 30分钟。
洗涤：操作同 4。
显色：每孔先加入显色剂 A 50μl，再加入显色剂 B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。
注意事项
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先将样本稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数（×5×n）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
本试剂不同批号组分不得混用。显色剂 B 请避光保存。
严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 线性范围：
0.3ng/L -15 ng/L
规格：96 人份/盒
保存条件及有效期
试剂盒保存：；2-8℃。
有效期：6个月
