小鼠游离三碘甲腺原氨酸（FT3）定量检测试剂盒（ELISA）

【检验原理】
试剂盒采用酶联免疫分析方法。生物素标记合成的T₃类似物，它的主要特点是在免疫反应中，不与TBG结合，又具有与甲状腺抗原相同的抗原性，在竟争抑制反应中，一定量的抗体与生物素标记的T₃类似物及非标记抗原（校准品或标本）进行竟争反应，抗体与生物素标记合成的T₃类似物结合量受非标记抗原量所抑制，非标记抗原量多，抗体与生物素标记合成的T₃类似物结合就少，反之结合就多；反应平衡后，形成固相抗体-生物素化T₃类似物，再加入酶标记的亲合素，形成固相抗体-生物素化T₃类似物-酶标-亲合素的复合物。经加底物显色后，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）。随着FT₃浓度的升高，OD值逐渐下降呈良好的线性关系。本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简单、快速等特点，对血清中FT₃的减少或升高有可靠的检出性能。
【主要组成成分】
主要成分

组分	数量	主要成分
校准品	0.5ml/管*5管	T3
包被微孔板	96T	兔抗T3，聚苯乙烯微孔板
酶标亲合素	6mL	HRP标记的检测抗原
生物素化抗原	6mL	生物素-T3类似物
底物液A	6mL	过氧化脲工作液
底物液B	6mL	TMB工作液
终止液	6mL	2mol/L稀硫酸
20×浓缩洗涤液	30mL	含0.15%Tween20的PBS
说明书	1份	--
自封袋	1个	--
不干胶	2片	--

校准品浓度依次为：32、16、8、4、2 pmol/L。
【检验方法】
操作程序
1.将各种试剂移至室温平衡1小时，取浓缩洗涤液，根据当批检测数量，用蒸馏水1：20稀释，混匀后备用。
2.将预包被板从密封袋中取出，设一个空白对照孔，不加任何液体；每个校准品设2孔，每孔加入对应校准品50μl；其余每个检测孔直接加待测血清或质控品50μl。
3.除空白孔外所有孔加入生物素化抗原50μl，混匀，贴上封板膜，置37℃温育60分钟。
4.手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置10秒甩干，重复3次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤3次程序洗板后拍干。
5.每孔加入酶标亲合素50μl（空白对照孔除外），混匀，贴上封板膜，置37℃温育30分钟。
6.手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置10秒甩干，重复3次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤3次程序洗板后拍干。
7.每孔加显色剂A 50μl，显色剂B 50μl，振荡混匀后，置37℃避光显色15分钟，每孔加终止液50μl。
8.用酶标仪读数，单波长酶标仪需先用空白对照孔调零点，然后测定各孔吸光值。


【实验结果计算】
1.各校准品、质控及样品的吸光值（OD值）均需扣除空白孔的OD值。
2.作图法：以校准品S1～S5的吸光值为纵轴（log对数坐标），相应浓度为横轴（log对数坐标），在对数坐标纸上绘制校准品曲线，在校准品曲线上查出待测标本的FT3含量（pmol/L）。
3.计算机：由电脑计算出其浓度。

【产品性能指标】
1.外观和物理检查：液体组分应澄清，无沉淀或絮状物，所有组分应无包装破损。各组分装量不少于表1中要求。
2.准确性: 以零标准将国家标准品配制成29pmol/L的浓度用双对数（log-log）拟合，要求国标的实测效价与标定效价的比应在0.90～1.10范围内。
3.线性: 用log-log数学模型拟合，在2~32pmol/L范围内，剂量-反应曲线相关系数（r）的绝对值应不低于0.9900。
4.精密度: 批内精密度（CV%）应不高于10.0%；批间精密度（CV%）应不高于15.0%。
5.最低检出限: 试剂盒最低检出限应不大于1.0pmol/L。
6.检测范围：2-32pmol/L