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规 格: 96T/48T
酶标仪检测波长: 450 nm
检 测 样 本 量: 50-100ul
实 验 种 属：人、大小鼠、兔子、牛、羊、猪、鸡、植物ELISA试剂盒等
检 测 目 的：用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
适 用 范 围:仅供科研
试 剂 盒 保 存：2-8℃。
有 效 期：6个月
一、双赢生物服务
我们可以根据您的应用需要，比如在检测范围、种属以及灵敏度等方面有特殊要求，而量身定制检测试剂盒，有效控制检测试剂成本。并可提供免费代测。
二、ELISA检测概述
ELISA（酶联接免疫吸附反应分析）是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。
三、技术流程
双抗体夹心法(检测未知抗原) | 间接法(检测未知抗体) |
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。 2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。 3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。 4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。 5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml 6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 | 1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。 2、加样：加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照) 3、加酶标抗体：于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。 4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。 5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml 6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 |
四、样本处理方案
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
5. 培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6. 组织标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
7. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
五、客户须知
1、液体类标本（细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑脊液等）；
2、样本保存：请尽早检测，2-8℃保存一天；需更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存。如需周期收集样本，请将样本及时分装标号后，置-20℃或-70℃保存；
3、请提前告诉我们：您样本的种属、样本数量、待测指标及其他特殊要求。
六、报告内容及标准
1、ELISA标准曲线；
2、详细的实验步骤；
3、完整的实验报告（试剂耗材，实验方法，实验结果及结果说明）；
4、实验进行阶段，我公司客服人员会及时向您汇报实验进程。
七、ELISA试剂盒免费代测服务须知
凡购买本公司目录任何一种检测试剂盒，您只需将需要检测的动物（Human,Rat,Mouse,Rabbit,Monkey,Pig……）种类和检测指标（介素类、因子类）及标本数量（48T/96T）通知公司业务员即可。在接到客户标本当日起，现货产品一周内将检测报告交到客户手中！
注意事项：收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。
寄标本时需注明以下情况：
1、标本编号；
2、所测项目；
3、是否做复孔；
4、实验后标本是否寄回。
